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目的:
探讨大鼠骨髓间充质干细胞在体外定向分化成神经干细胞和成熟神经细胞的可能性,并观察间充质千细胞移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能恢复的影响及细胞的存活、迁移和向神经细胞分化的情况。
方法:
直接贴壁培养方法分离纯化大鼠骨髓间质干细胞,体外实验采用EGF,bFGF,BDNF,RA对传至第3代细胞进行诱导分化,采用单层贴壁培养和悬浮培养两种方式,对间充质干细胞分化成神经干细胞和神经细胞进行研究,用免疫细胞化学方法对诱导分化的神经球样细胞和神经样细胞进行鉴定;体内试验利用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶性脑缺血模型,通过立体定向技术将Hoechst33342标记的MSCs或生理盐水(对照)移植到大鼠缺血侧脑室,移植后1、3、6、12、24天采用改良神经功能损害评分(mNSS)观察大鼠神经功能恢复情况,应用免疫荧光技术检测Hoechst33342标记的MSC细胞的存活、迁移及其神经元特异的微管相关球蛋白(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。
结果:
在体外经EGF,bFGF,BDNF,RA诱导,大鼠MSC可以定向分化成Nestin阳性的神经干细胞,并能够进一步分化成MAP-2阳性的神经元细胞;MSCs移植可显著促进大鼠局灶性脑缺血后神经功能的恢复,具有统计学意义;移植的MSC细胞可在大鼠脑组织中存活,并向缺血区域迁移,10.45±1.35%MSC表达MAP-2,8.73±1.38%MSC表达GFAP。
结论:
大鼠MSC在体外可以定向诱导分化成神经干细胞和成熟神经细胞;移植细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移并向神经元和星形胶质细胞分化,同时能促进局灶性脑缺血大鼠的神经功能恢复。