七氟烷对新生大鼠海马组织端粒酶逆转录酶表达及神经细胞凋亡的影响

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qimao1986
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目的:研究七氟烷对新生大鼠海马组织端粒酶逆转录酶(TERT)的影响,探讨七氟烷导致神经细胞凋亡与TERT表达的关系。  方法:出生后7天的SD大鼠40只随机分为对照组(C组)20只、七氟烷吸入组(S组)20只。23℃室温下,将对照组大鼠(C组)放入特制有机玻璃箱持续吸入纯氧,氧流量2L/min。实验组(S组)放入与对照组相同大小质地的有机玻璃箱予2.3%七氟烷吸入(氧流量2L/min),箱底平铺钠石灰吸收呼出的二氧化碳。实验过程中持续观察新生大鼠的皮肤色泽、呼吸频率及呼吸动度、氧饱和度仪测量新生大鼠的脉搏氧饱和度和心率。持续监测箱内七氟烷MAC浓度和出气端二氧化碳浓度。实验过程中凡出现大鼠肤色发绀、呼吸微弱、脉搏氧饱和度低于96%、心率低于100次/分不计入结果。六小时后,记录所有大鼠生命体征,选取合格(未出现发绀,脉搏氧饱和度96%以上,心率100次/分以上)的大鼠。最终,实验组16只合格,对照组20只均合格。待新生大鼠苏醒(大鼠自由活动,逃避反射恢复)后1小时,活体1分钟内取出大鼠海马组织。用苏木精-伊红染色法(HE染色)及原位末端脱氧核糖转移酶标记法(TUNEL)观察海马神经细胞凋亡情况,用免疫组织化学(IHC)以及实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)分析海马组织端粒酶逆转录酶蛋白质与mRNA表达。  结果:1.HE染色显示:对照组(C组)海马细胞排列紧密,细胞核圆而大,核仁清晰胞浆丰富,着色均匀为蓝紫色,细胞核为圆形或椭圆形,可见深染的核仁。而七氟烷吸入组(S组)海马神经细胞排列紊乱,细胞形态不规则,细胞体积变小,可见核固缩现象,伴有空泡细胞形成。2. TUNEL显示:与对照组(C组)神经元凋亡数量(1.324±0.032)相比,七氟烷组(S组)海马神经元凋亡数量(11.408±2.357)显著提高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.免疫组化结果显示:与对照组(C组)TERT表达情况相比,七氟烷组(S组)TERT强阳性、阳性和弱阳性表达均较低,且差别有统计学意义(P<0.05)。4. Real-Time PCR结果显示:与对照组(C组)2-ΔΔCt相比,七氟烷组(S组)2-ΔΔCt的值是对照组的1/14.281,较对照组明显降低。  结论:七氟烷可能通过下调端粒酶逆转录酶表达促使神经细胞凋亡。
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