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紫杉醇是治疗卵巢癌的一线化疗药,但在临床应用过程中易引起耐药而导致肿瘤复发和转移的情况。消癌平注射液在临床上常作为紫杉醇等化疗药的辅助药物。消癌平注射液与紫杉醇联合的协同增效作用及分子机制有待阐明。目的:研究消癌平注射液对核受体PXR,及其下游药物代谢酶CYP2C8、CYP3A4、CYP3A5和转运体P-gp的调控作用,阐明消癌平注射液通过调控核受体PXR对紫杉醇抗卵巢癌的增效作用和分子机制,为卵巢癌的防治提供新思路。方法:消癌平注射液与紫杉醇单用或联合作用于卵巢癌细胞A2780和SKOV3细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,采用中效原理计算两药联用指数CI,评价两药联用的作用效果。使用倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测的细胞凋亡和细胞周期分布情况。采用qRT-PCR和Western blot法检测核受体PXR、CAR及下游代谢酶CYP2C8、CYP3A4、CYP3A5和转运体P-gp的表达水平,检测Bcl-2家族凋亡相关蛋白的表达水平;通过流式细胞仪检测细胞中罗丹明123的蓄积,判断P-gp的活性。为进一步探讨PXR在消癌平注射液增强紫杉醇抗卵巢癌中的作用,通过转染PXR质粒使卵巢癌A2780、SKOV3细胞过表达PXR,qRT-PCR和Western blot检测相关mRNA和蛋白表达水平。通过SKOV3细胞构建卵巢癌异位移植瘤裸鼠模型,评价消癌平注射液和紫杉醇两药联用对肿瘤生长的作用;TUNEL染色检测肿瘤组织中的细胞凋亡情况;采用qRT-PCR和Western blot法检测肿瘤组织中核受体PXR及下游代谢酶CYP2C8、CYP3A4、CYP3A5、转运体P-gp及凋亡相关蛋白的mRNA和蛋白表达水平。结果:1.消癌平注射液联用紫杉醇对卵巢癌细胞具有协同增效作用与紫杉醇单用相比,消癌平注射液和紫杉醇联用对卵巢癌A2780和SKOV3细胞的增殖抑制作用显著增强。作用24h内消癌平注射液浓度低于160 mg/mL和紫杉醇浓度低于160 nmol/L、48h内消癌平注射液浓度低于40 mg/mL和紫杉醇浓度低于10 nmol/L的联用指数CI均小于1,即两药呈协同增效。紫杉醇联用消癌平注射液后,细胞数明显少于紫杉醇单用组,形状不规则,伴有较多飘浮的死细胞和细胞碎片,核染出现大量的致密核团,部分细胞核形状不规则,提示大量细胞出现核固缩,细胞已进入凋亡阶段。流式细胞仪检测结果显示,与紫杉醇单用组相比,紫杉醇联用不同剂量的消癌平注射液后,A2780细胞的凋亡率由8.66%增加至15.49%和71.23%,SKOV3细胞凋亡率由7.85%增加至10.52%和19.36%,且SKOV3的G2+M期的分布明显被抑制,G0+G1和S期的分布增加。2.消癌平注射液通过PXR增强紫杉醇抗卵巢癌作用qRT-PCR结果显示,与对照组相比,紫杉醇可显著上调卵巢癌A2780、SKOV3细胞中PXR、CAR、CYP2C8、CYP3A4的mRNA的表达,与消癌平注射液联用后,上述mRNA表达水平降低。Western blot结果显示,紫杉醇能激活A2780和SKOV3细胞中PXR、CAR、CYP2C8、P-gp和Bcl-2、Bcl-xl的蛋白表达,联用消癌平注射液后这些蛋白的表达被显著抑制。转染了PXR质粒的卵巢癌A2780、SKOV3细胞中,PXR、CYP2C8、P-gp、Bcl-2、Bcl-xl的表达相应升高,加入消癌平注射液可抑制其蛋白及mRNA水平,且高剂量消癌平注射液的作用更强。流式细胞仪检测结果显示,紫杉醇减少卵巢癌A2780、SKOV3细胞中罗丹明123的蓄积,而消癌平注射液可逆转这一作用,联用后荧光强度增加,即P-gp活性被抑制。3.消癌平注射液增强紫杉醇在裸鼠体内的抗卵巢癌作用异位移植瘤裸鼠模型的体内实验发现,消癌平注射液联用紫杉醇可显著抑制肿瘤生长,且效果优于紫杉醇单用组和消癌平注射液单用组;qRT-PCR和Western blot结果显示,紫杉醇可上调肿瘤组织中的PXR、CAR、CYP2C8、CYP3A4、P-gp及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Bad、Bax的表达,联用消癌平注射液后,被激活的PXR、CAR、CYP2C8、CYP3A4、P-gp及抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl受到抑制,其mRNA、蛋白水平下降,促凋亡蛋白Bad表达升高。结论:消癌平注射液可增强紫杉醇的抗卵巢癌效果,其分子机制可能与消癌平注射液抑制核受体PXR的表达,从而影响代谢酶CYP2C8、转运体P-gp和抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表达和活性有关。该研究将为中药与化疗药物联合治疗恶性肿瘤提供理论依据,有助于丰富中西医结合治疗肿瘤理论。