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致病性大肠杆菌是危害畜禽健康的常见病原菌之一,可引发犊牛的腹泻和泌乳牛的乳腺炎及子宫炎等疾病。因其携带的毒力因子和血清型复杂多样,且存在地区差异,现在还没有较为理想的免疫疫苗,临床上主要应用抗菌药物进行预防和治疗。然而,因抗菌药物的大量使用和滥用,临床分离的菌株的耐药性发展迅速,对预防和控制动物疾病构成严峻挑战。本试验收集2015-2016年我国部分地区规模化奶牛场病料112份,经鉴别培养基培养、持家基因phoA的PCR扩增以及动物试验获得致病性牛源大肠杆菌84株。对其进行16种毒力基因的PCR检测,结果显示,携带毒力基因的致病性大肠杆菌有60株,检出率达71.43%。其中F41的检出率最高,占毒力基因阳性菌株的31.67%,其次是CS31A(28.33%),F17(26.67%),irp2(18.33%),LT和hlyA检出率最低,仅为1.67%。多种毒力基因组合以F41+K99为主,不同地区分布的毒力基因类型不同。采用药敏纸片扩散法检测84株致病性牛源大肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性和耐药性,结果显示,从牛分离出的致病性大肠杆菌对阿米卡星、多粘菌素B和氨曲南表现为相对敏感,敏感率为66.67%、60.71%和60.71%;而对阿莫西林、氨苄西林和土霉素表现为高度耐药,耐药率为91.67%、89.29%和88.10%。所有分离菌株表现出16种耐药谱系,主要以12耐、13耐和17耐为主,不同地区耐药性和耐药谱系不同。分离菌株对16种药物主要变现出15种耐药表型,其中阿莫西林-头孢氨苄-甲氧苄啶-链霉素-多西环素-土霉素-环丙沙星为优势耐药表型。采用微量肉汤稀释法和棋盘法测定头孢噻呋与甲氧苄啶单独用药及联合用药后对致病性牛源大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),计算部分抑菌浓度(FIC)指数,判断两药联用后的相互作用;采用琼脂二倍稀释法测定两药单用及联合后的防突变浓度(MPC),计算选择指数SI(MPC/MIC)。结果表明:头孢噻呋的MIC为0.5-4μg/mL,甲氧苄啶的MIC为0.5-256μg/mL,两者联用后的FIC指数为0.25-1,表明两药联用呈协同或相加作用。头孢噻呋单用的MPC为64-512 μg/mL,SI为64-256;与甲氧苄啶联合使用后其MPC为16-32 μg/mL,SI下降为8-64;甲氧苄啶单用时的MPC为512 μg/mL,SI为1-4;与头孢噻呋联用后,其MPC和SI未发生改变,说明头孢噻呋与甲氧苄啶联用不能降低甲氧苄啶单用的防突变浓度,但可降低头孢噻呋单用对致病性牛源大肠杆菌的防突变浓度,缩小耐药突变选择窗。本试验通过对我国部分地区规模化奶牛场致病性大肠杆菌毒力基因和耐药性的检测,初步揭示了致病性牛源大肠杆菌毒力基因和耐药现状,对研制以毒力基因为基础的新型疫苗及抗菌药物在临床上的合理应用具有重要意义;通过探讨体外头孢噻呋单用及联合甲氧苄啶对致病性牛源大肠杆菌MPC的影响,为缩小牛源大肠杆菌耐药突变选择窗提供了试验依据。