培养基组分对灵芝多糖单糖组成的影响以及生物活性的研究

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hongyanzhiji761112
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灵芝多糖具有调节机体免疫系统、提高机体免疫力、抗肿瘤、提高血液供氧、加速血液微循环、消除体内自由基、抗氧化、抗衰老的生物活性。据文献报道,富含末端岩藻糖结构的灵芝多糖具有能使小鼠抗血清中的抗体更好地去识别并结合肿瘤表面相关抗原并且促进小鼠腹膜中的B1B细胞产生的能力,从而激活宿主的免疫反应,达到提前预防以及抑制肿瘤细胞生长的目的。我们设想如果能通过在灵芝发酵培养的过程中改变培养基的组分,提高灵芝多糖结构中岩藻糖的含量,将会大大提高灵芝多糖的抗肿瘤效应和生物活性。在本研究中,根据GDP-Fuc的两条代谢途径(从头合成途径及补救途径),通过对灵芝多糖的发酵培养基组分进行改造,即在灵芝多糖的发酵培养基中,添加游离的岩藻糖、甘露糖或者岩藻多糖,来研究能否提高灵芝多糖中的岩藻糖含量,并寻找能使灵芝多糖中岩藻糖含量达到最高的最佳添加物及添加浓度。结果表明:与在灵芝多糖的发酵培养基中添加游离的岩藻糖或者甘露糖相比,添加岩藻多糖时,可以大幅的提高灵芝多糖中的岩藻糖的含量。其中,当在灵芝多糖的发酵培养基中添加5 g/L岩藻多糖时,实验组灵芝多糖中的岩藻糖含量比对照组的含量由1.02%大幅提高到15%。同时研究了岩藻多糖的添加量在0.8 g/L,1.6 g/L,2.4 g/L,4.8 g/L,6.4 g/L时,对灵芝多糖中岩藻糖含量的影响。结果表明:当灵芝多糖培养基中岩藻多糖的添加量为4.8 g/L时,为最佳发酵培养基配方,灵芝多糖中的岩藻糖含量由1%提高到17%。由此可知通过在灵芝菌的发酵培养的过程中,向培养基中添加岩藻多糖时,可大幅提高灵芝多糖中岩藻糖的单糖含量。灵芝多糖理化性质的研究:对灵芝粗多糖进行了 sevage法脱蛋白、过氧化氢脱色、透析浓缩后,利用DEAE cellulose-52纤维素阴离子交换柱和Sephacry1 S-300 High Resolution分子筛对灵芝多糖进行了分级纯化。利用多角度激光散射仪以及离子色谱仪,对灵芝多糖的性质进行了测定。利用多角度激光散射检测纯化后的的普通培养基培养的灵芝多糖,其主要组分占94.6%,分子量为1.262×104 Da,纯化后的添加岩藻多糖培养基培养的灵芝多糖的主要组分占82.4%,分子量为 1.233×10~4Da。灵芝多糖的小鼠体内抗肿瘤实验的生物活性研究结果表明:对比研究添加岩藻多糖培养基的灵芝多糖以及普通培养基的灵芝多糖的生物活性。体内抗肿瘤实验结果表明:在免疫灵芝多糖浓度为300 mg/kg时,实验组与对照组相比,抑瘤率由37%提高到58%,提高了 21%。表明了添加岩藻多糖的灵芝多糖培养基培养的灵芝多糖具有了更好的抗肿瘤活性。灵芝多糖的体外抗氧化性以及细胞毒性实验的生物活性研究结果表明:分别测定了羟自由基、DPPH自由基、超氧阴离子清除能力和还原能力四个指标。结果表明:与普通葡萄糖培养基相比,添加了岩藻多糖的灵芝多糖培养基培养的灵芝多糖在四个指标中均表现出更高的抗氧化活性。通过体外抗氧化实验,进一步证明了,添加了岩藻多糖的培养基的灵芝多糖比普通葡萄糖培养基培养的灵芝多糖具有更好的生物活性。
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