Rs-AFP2基因植物表达载体的构建及其转化辣椒的研究

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目前栽培的辣椒品种大多极易遭受真菌、细菌、病毒和线虫等侵染而引起严重病害,给辣椒生产造成重大的经济损失。利用日益成熟的基因工程技术来提高辣椒的抗病性,培育高抗性辣椒新品种,已成为国内外辣椒抗病研究的新策略。来源于马铃薯编码谷胱甘肽转移酶(GST1)的病原菌防卫基因基因prp1-1启动子能受马铃薯晚疫病等多种病原菌侵染诱导。本研究克隆了prp1-1启动子片段(273bp),构建了萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP2)基因诱导型植物表达载体pBPR-2,另外还构建了萝卜抗真菌蛋白(Rs-AFP2)基因组成型植物表达载体pBCR-2,并将它们导入保加利亚尖椒。所获得的主要结果如下: (1)利用PCR方法直接从马铃薯叶片总DNA中克隆了受真菌诱导的prp1-1启动子片段,构建了萝卜抗真菌蛋白基因诱导型植物表达载体pBPR-2,使prp1-1启动子片段控制Rs-AFP2基因受真菌诱导表达;同时构建了Rs-AFP2基因组成型植物表达载体pBCR-2。 (2)建立了保加利亚尖椒的再生体系,优化了辣椒子叶外植体不定芽诱导分化和不定芽的伸长培养基配方。最佳不定芽诱导分化培养基为:MS+6-BA 5.0mg/L+IAA 0.5mg/L+AgNO3 5mg/L+PT 0.3mg/L;最佳不定芽伸长培养基为:MS+GA3 1mg/L+6-BA 1.5mg/L+PT 0.3mg/L;最佳生根培养基为:MS+IAA1.0mg/L+NAA 0.5mg/L。 (3)优化了重组农杆菌GV1301转化辣椒的方法。外植体预培养2d、农杆菌侵染7min、共培养3d为比较理想的转化条件,有利于提高转化率;另外,AS能在一定程度上提高转转化率,100μmol/L就可以达到较好的效果。 (4)将Rs-AFP2基因导入保加利亚尖椒。转化后再生的植株经PCR和PCR-Southern杂交检测,证实Rs-AFP2基因已经整合到保加利亚尖椒基因组中,分别得到了Rs-AFP2基因诱导型表达(pBPR-2)和组成型表达(pBCR-2)的保加利亚尖椒转化植株。
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