基于IR-780荧光团的Zn~(2+)近红外荧光探针研究

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锌离子是多种酶和转录因子的必需组成成分,广泛的分布于人体的细胞和体液中,直接参与体内细胞的生长发育、生殖和组织修复等各种生命代谢过程。Zn2+在细胞的生命活动中起着非常重要的作用,在基因转录、金属酶催化、神经传递等过程中都有Zn2+的参与。随着人们对Zn2+在生命活动中的作用认识越来越深,细胞内Zn2+的研究成为化学、生物学和临床医学等学科重要的前沿热点研究课题。荧光检测方法具有操作简便、灵敏度高等优点,近红外荧光探针更是具有激发波长较长,可避免对活体细胞的损伤及其减小背景干扰的优势,因此设计合成Zn2+的近红外荧光探针具有重要意义。碱性磷酸酯酶(ALP)是一种金属锌酶,它广泛的存在于各种生物体内,在磷酸盐的代谢中起着重要的作用。ALP在组织中的含量和活性还是肝胆疾病和骨骼疾病的一个指示剂,在临床诊断和分析中具有十分重要的意义。因此设计合成高灵敏度的ALP荧光探针具有十分重要的意义。本论文主要完成了以下研究工作:1、以三碳菁染料IR-780为荧光团,三(2-氨乙基)胺(TAEA)为识别基团合成了一种新型的Zn2+近红外荧光探针TAEA-IR-780,该探针通过配位作用与Zn2+结合后,荧光显著增强。探针的结构用质谱、氢谱进行了表征,并探讨了pH值、其它金属离子对Zn2+检测的影响。该探针的激发波长为683 nm,发射波长为750 nm,可避免对生物活体细胞的损伤,同时生物体内常见的金属离子对其干扰较小。该探针对Zn2+的检测下限达1.00×10-9 mol·L-1,具有较高的检测灵敏度。2、三碳菁染料IR-780为荧光团,合成了一种以二(2-吡啶甲基)胺(DPA)为识别基团的Zn2+近红外荧光探针DPA-IR-780,该探针与Zn2+结合后,荧光明显增强。探针的结构用质谱、氢谱进行了表征,并探讨了pH值、其它金属离子对Zn2+检测的影响。该探针的激发波长为686 nm,发射波长为764 nm,可避免对生物活体细胞的损伤,同时生物体内常见的金属离子对其干扰较小。该探针对Zn2+的检测下限可达1.00×10-10 mol·L-1,具有较高的检测灵敏度。3、合成了一种ALP的荧光探针荧光素单磷酸酯(FMP),探针在ALP的催化作用下水解,荧光显著增强。探针的结构用质谱、氢谱进行了表征,并研究了不同的培育时间,不同浓度的ALP对催化FMP水解情况的影响,探讨了ALP催化FMP水解的作用机理。该探针的检测下限为1.83×10-9 mg·mL-1,有较高的灵敏度。
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