一、研究背景：特发室性早搏(Idiopathic premature ventricular contractions, IPVCs)是临床上最常见心律失常之一,是指不伴有器质性心脏病证据的室性早搏,发病机制尚未完全明确。既往认为是“良性”病变,但目前发现极少部分预后差,可致病理或器质性心脏改变,严重者易触发致命性室性心律失常而猝死。临床药物治疗效果不理想,易反复发作,造成患者心理、精神上的沉重负担,降低生活质量。近年来射频消融(Radiofrequency ablation, RFCA)技术的发展,多数频发的IPVCs可以根治,但其适应症存在争议,仅限于频发、症状明显且药物效果不好的患者。上述问题可归结于对其发病机制认识不深。随着分子遗传学的发展,心律失常的分子机制可深入阐明,探讨群体间致病基因单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism, SNP)已成可能,且有望依据基因型指导临床的防治举措。心电活动受自主神经系统紧密调节,β1肾上腺素能受体(β1adrenergic receptor,β1-AR)是心脏的主要β-AR,在介导心脏交感神经-肾上腺系统信号转导中发挥着重要的作用。β1-AR基因有两个最重要的SNP：核苷酸145A→G和1165C→G,相应的氨基酸置换分别为49位Ser→Gly,389位Arg→Gly。其中Arg389Gly (C389G) SNP位于细胞内胞浆尾端近第七跨膜区,此处被认为是受体与Gs蛋白偶联的重要区域。体外突变研究表明Arg389受体与Gly389受体相比具有更高的基础腺苷酸环化酶活性和异丙肾上腺素激动的腺苷酸环化酶活性,提示β1-AR基因C389G位点SNP在IPVCs的发生与发展过程中可能具有重要的生物学意义。目前国外有研究表明β1-AR基因C389G位点SNP与特发室性心律失常的发病相关,且该基因分布存在种族差异,国内尚未见相关报道。本研究采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)技术进行病例对照研究,旨在探讨国人β1-AR基因C389G位点SNP与频发的IPVCs发生发展中的关系,期望在分子基因学水平阐明IPVCs发生发展的可能机制或特点,为临床防治提供基础依据。二、研究目的：以华南地区汉族人群144例频发的IPVCs患者和142例健康对照者为研究对象,建立临床资料,检测血浆肾素活性(Plasma renin activity, PRA)及窦性心率震荡(Heart rate turbulence, HRT)的指标震荡初始(turbulence onset, TO)、震荡斜率(turbulence slope, TS)值水平,对交感神经系统通路中可能涉及频发的IPVCs发病的β1-AR基因C389G位点检测,了解该位点SNP与华南地区频发的IPVCs人群的关联情况；探讨PRA及HRT各指标与β1-AR基因C389G位点SNP的关系；并进一步对频发的IPVCs患者进行RFCA治疗,比较治疗前后PRA及HRT各指标变化与β1-AR基因C389G位点SNP的关系。从而在自主神经调节的角度探索β1-AR基因在华南汉族人群频发性IPVCs发生发展中的可能作用。三、研究对象：研究对象均来自2007年9月-2009年8月南方医院心内科因频发IPVCs住院病人及健康体检人员。IPVCs组入选标准：①24h动态心电图检查总室早数目大于720/24h且能进行HRT分析(有任一室早的前2次、后15次心律为窦性心律)者；②体检、胸片、心脏彩超等检查均未发现器质性心脏病；③无其他重要脏器疾患、电解质紊乱及其他可致室性早搏的因素。排除标准：①非窦性心律患者,如房颤、房扑、临时和永久起搏器植入者等；②病态窦房结综合征、房室传导阻滞者；③1周内服用抗心律失常药物及影响自主神经药物者。对照组入选标准：健康体检人员：①24h动态心电图检查早搏数小于100/24h者,并同时符合室早组的②、③及上述排除标准的患者。所有研究对象均为华南地区汉族人群(无血缘关系),且已获知情同意。根据以上标准,共入选频发特发室早患者144例,年龄平均(42.98±10.03)岁,其中男性56例,女性88例,24h室早数(12671±8464)次,室早负荷(24h室早数占总心率的百分比：11.63±7.82)；入选健康对照组142例,年龄平均(42.01±8.96)岁,其中男性51例,女性91例,24h室早数(44±29)次,室早负荷(0.04±0.03)。四、研究方法：两组均建立临床资料观察表,详细记录研究对象的姓名、性别、年龄、身高、体重、血压、吸烟史、饮酒史等一般情况；测定血清生化指标：胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三脂(Triglyceride,TC)、血糖、血钠、血钾、血浆肾素活性(PRA)；均进行24h动态心电图检查：记录24h室早总数、平均心率、室早负荷(24h室早总数占总心率的百分比),并进行HRT初始值(TO)、震荡斜率(TS)的分析计算。用试剂盒提取研究对象静脉血白细胞基因组DNA,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法鉴定β1-AR基因C389G位点的多态性(SNP)。对室早负荷≥10.0的症状性频发室早患者进行射频消融治疗,术后1月检测血PRA并作24h动态心电图检查进行HRT分析。比较两组之间不同基因型、等位基因频率的分布及临床资料、各血生化指标、PRA等的差异。比较不同基因型心率震荡TO、TS值及HRT异常率的差异。比较不同基因型频发室早患者射频消融前后的PRA、TO、TS值的变化,分析β1-AR基因C389G位点SNP与RFCA疗效的关系。HRT异常定义：TO值≥0%和(或)TS≤2.5ms/RR。五、统计分析：用SPSS13.0统计软件分析。计量资料符合正态分布的以均数±标准差表示,计数资料以频数表示。遗传平衡检验采用Hardy-Weinberg平衡定律。计数资料组间比较采用χ2检验。正态分布计量资料的组间比较经方差齐性检验,多样本均数比较方差齐性者采用one-way ANOVA,同一样本均数前后比较采用协方差分析,组间多重比较采用LSD法；两样本间均数比较方差齐者采用独立样本的t检验,方差不齐者采用t’检验。用单变量logistic回归分析探讨基因多态性与室早发生的关系,计算优势比(odds ratio,OR)及95%可信区间(95% confidenceinterval,95%CI)。检验水准α=0.05。六、结果：1.β1-AR基因C389G位点SNP在中国华南地区汉族人群中存在3种基因型,PCR-RFLP后电泳鉴定产物：1为CC基因型,2为CG基因型,3为GG基因型。室早组及健康对照组CC、CG、GG基因型分布频率分别为：60.4%、33.3%、6.3%及47.9%、38.7%、13.4%。2.室早组与对照组的计量资料均符合正态分布。室早组与对照组之间的年龄、性别、基础心率、体重指数(BMI)、吸烟、饮酒、收缩压、舒张压、血钠、血钾、血糖、TG、TC无显著性差异,P值分别为0.388、0.603、0.155、0.510、0.942、0.598、0.143、0.168、0.331、0.608、0.956、0.739、0.932。而室早组与对照组之间PRA有显著性差异,P值为0.000,室早组PRA大于对照组。两组间HRT值TO、TS及HRT异常率有显著性差异,P值分别为0.000、0.000及0.024,室早组TO值大于对照组,TS值小于对照组,室早组HRT异常率高于对照组。3.室早组β1-AR基因C389G位点CC、CG及GG型频率分布与对照组比较有显著性差异(χ2=6.363,P=0.042)。室早组β1-AR基因C389G位点CC型频率分布高于对照组。室早组β1-AR基因C389G位点等位基因频率分布与对照组比较有显著性差异(χ2=6.884,P=0.009)。室早组β1-AR基因C389G位点C等位基因频率分布高于对照组。4.单变量logistic回归分析β1-AR基因C389G位点基因多态性与室早的关系,相对CC基因型而言, CG+GG基因型与纯合子GG基因型, OR值(95%CI)分别为0.602(0.377-0.962)、0.370(0.158-0.870),P值分别为0.034、0.023,提示CG+GG基因型与GG基因型是室早的保护因素。CG型的OR值(95%CI)为0.682(0.414-1.125),P=0.134。β1-AR基因C389G位点G等位基因对室早的相对危险度,相对C等位基因而言,OR值(95%CI)为0.611(0.422-0.884),P=0.009。5.三种基因型PRA值的方差分析F值为7.374,P值为0.001,三种基因型的PRA有显著性差异；两种基因型之间的比较采用LSD-t检验,GG型与CC、CG型PRA存在统计学差异,P值分别为0.000和0.010,而CC型与CG型之间PRA无显著性差异,P=0.088,CC型与CG型的PRA高于GG型。6.三种基因型TO、TS值的方差分析F值分别为8.968、12.113,P值均为0.000,三种基因型的TO、TS值的比较有显著性差异。TO、TS值两种基因型之间的比较采用LSD-t检验,GG型与CC、CG型TO和TS值存在统计学差异,P值分别为0.000、0.003和0.000、0.000,而CC型与CG型之间TO和TS值无显著性差异,P值分别为0.085和0.055。CC型与CG型的TO值高于GG型,而CC型与CG型的TS值则低于GG型。三种基因型HRT异常率的比较采用χ2检验,χ2值为6.584,P=0.037,CC、CG、GG型HRT异常率分别为30.3%、20.4%、10.7%,CC及CG型的HRT异常率高于GG型。7.频发室早射频消融后的PRA、HRT指标较消融前改善,协方差分析比较不同基因型的改善情况,PRA、TO、TS的F值分别为3.595、3.663、3.355,P值分别为0.033、0.031、0.041,不同基因型术后PRA、TO、TS值的比较有显著性差异。对各值调整后的均数进行比较显示：CC型改善最大,CG型次之,而GG型改善最小。七、结论：1.β1-AR基因C389G位点SNP存在于华南地区汉族人群中,其分布频率在特发室早及健康人群之间不同。2.β1-AR基因C389G位点SNP与华南地区汉族人群特发室早的发生有相关性,C等位基因是室早的易患基因,G等位基因是室早发生的保护基因。3.β1-AR基因C389G位点SNP与HRT的异常有相关性,其与HRT异常率的关系为：GG<CG<CC。4.β1-AR基因C389G位点SNP影响特发室早发生的可能机制：C等位基因导致高交感神经兴奋性及自主神经功能异常,进而增加特发室早的发病风险。5.射频消融治疗对各基因型频发室早自主神经改善的效果关系：GG<CG<CC。HRT指标可能是评价特发室早射频消融治疗疗效的新指标。