猪是流感病毒重要的宿主之一,不仅能感染人流感病毒,而且能感染禽流感病毒,对当前的流感生态环境的形成起到重要的作用。甲型H1N1/2009流感病毒的爆发,说明猪能够独立地促进流感毒株的产生。猪流感(Swine Influenza,SI)由猪流感病毒(Swine Influenza Virus,SIV)引起,是一种急性和高度感染性呼吸系统性疾病,一般呈现地方流行性。典型的临床症状表现为突发性咳嗽、高热、嗜睡、厌食、鼻涕、呼吸困难和体重下降等,具有高发病率但低死亡率的特征。SI极易导致继发感染或混合感染,以致进一步发展成猪呼吸道疾病综合症,造成一定的经济损失。H1N1、H1N2和H3N2亚型猪流感病毒是目前主要的流行毒株。为了调查中国华南地区猪群猪流感病毒和甲型H1N1/2009流感病毒(H1N1pdm09)的流行情况,本研究于2013年10月至2014年9月期间,在中国华南地区的广东省、江西省、湖南省、福建省和广西壮族自治区共73个猪场,采集未进行流感疫苗免疫的临床健康猪的血清样品2,208份。采用欧亚类禽猪流感H1N1、类人猪流感H3N2和甲型H1N1pdm09流感病毒,通过血凝抑制试验(HI),对这2,208份血清进行SIV和H1N1pdm09流感病毒血清学检测。结果显示流感病毒抗体为阳性的血清共1,269份(57.42%)。SIV和H1N1pdm09流感病毒的流行存在明显的区域性差异,其中广东省和广西壮族自治区的感染率最高(p<0.01),分别为64.48%和75.00%。EA H1N1、H3N2 SIV和H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率分别是22.51%、32.97%和26.49%。H1N1pdm09流感病毒的抗体几何平均滴度(Geometric Mean Antibody Titers,GMT)最高(91.93±1.04,p<0.05)。EA H1N1和H3N2 SIV在冬季血清阳性率最高,然而在冬末(2月)阳性率却最低(p<0.01)。H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率在5月和9月出现高峰(p<0.01)。母猪体内的EA H1N1和H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率分别为25.93%和28.04%,均比仔猪(19.63%和23.29%)和育肥猪(22.32%和27.16%)高,但仔猪的H3N2 SIV抗体阳性率却比较高。本研究为华南地区猪场SIV和H1N1pdm09流感病毒的预防提供参考依据。普遍认为,疫苗是抵抗流感病毒感染最有效的方法。至今,油佐剂的全病毒灭活疫苗是应用最广泛且技术最成熟的猪流感病毒疫苗。本研究利用反向遗传技术,成功构建了H3N2亚型猪流感病毒L22的8质粒系统。将A/swine/Guangdong/L22/2010(H3N2)猪流感病毒的HA、NA基因与A/Puerto Rico/8/1934的6个内部基因片段重组,拯救出rL22/PR8。经鉴定,rL22/PR8的基因序列与亲本毒株和PR8的相应基因片段序列一致。将rL22/PR8接种至9日龄的SPF鸡胚后,其HA血凝效价提高到210,EID50结果提高到1.78×109EID50/mL,且未见鸡胚死亡,说明重组病毒rL22/PR8具有良好的鸡胚适应性。将rL22/PR8全病毒灭活疫苗辅以佐剂免疫小鼠,通过检测血清中的HI抗体评价其免疫效果,结果表明该疫苗能有效刺激小鼠产生高滴度的HI抗体,可达1920。研究为疫苗的研发奠定了基础,rL22/PR8可以作为疫苗候选株。