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越来越多的研究表明了雌激素受体(estrogen receptor,ER)基因和卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)基因对环境污染物尤其是内分泌干扰物相当敏感,二者经常被用作检测污染物的生物标志物,在环境分泌干扰物污染风险预测和评价中发挥着重要作用。目前也已经从多种脊椎动物和无脊椎动物中得到了它们的基因全长,但是作为环境污染物的指示生物—双齿围沙蚕ER和VTG基因的获得尚未见报道。本研究以双齿围沙蚕(Perinereisaibuhitensis)转录组文库中已有的ER和VTG中间序列片段为基础设计引物,利用cDNA快速末端扩增法(rapid-amplification of cDNAends,RACE)进行双齿围沙蚕ER和VTG基因全长cDNA序列扩增,并对获得的全长基因序列进行结构分析。利用实时定量PCR技术,对苯并(a)芘(benzo (a) pyrene,B(a)P)诱导下双齿围沙蚕体壁中ER和VTG基因表达变化特征进行分析。具体结果如下:1.双齿围沙蚕ER基因cDNA全长2793bp,其中包括114bp的5ˊ端非编码区,1398bp的3ˊ端非翻译区和1281bp的开放阅读框,编码426个氨基酸。该序列已上传至NCBI,GENBANK号为KF673856。序列分析发现该蛋白具有DNA结合区(88-163)和配体结合区(239-419), DNA结合区中包括两个核受体C4类型的锌指结构CLVCGDVASGYHYGVASCEAC (91-111)和CPANGICEITKRRRKACQAC (127-146)。生物信息学分析表明,该序列编码的蛋白质分子质量为47643.5Da,理论等电点为5.45,不具有信号肽位点和跨膜区,推测该蛋白为亲水性蛋白。多序列比对结果显示双齿围沙蚕ER氨基酸序列与部分软体动物、鱼类、哺乳类以及两栖类的ER蛋白序列同源性介于55%-59%。2.双齿围沙蚕VTG基因cDNA全长5325bp,其中5ˊ端非翻译区为47bp,3ˊ端非翻译区为199bp,开放阅读框为5079bp,编码一个由1692个氨基酸组成的蛋白质。该序列已上传至NCBI,GENBANK号为KF212194。该蛋白具有1个Vitellogenin结构域(31-718)和1个VWFD结构域(1401-1613)。通过生物信息学分析表明,该序列编码的蛋白质分子质量为185270.5Da,理论等电点为8.66,具有信号肽位点,无跨膜区,推测为分泌蛋白。同源性分析表明,双齿围沙蚕VTG氨基酸序列与部分软体动物和鱼类的同源性很低,介于21%-27%之间。3. B(a)P暴露下双齿围沙蚕ER mRNA的表达量随着暴露天数的延长出现上升趋势,0.5μg/L B(a)P组在4、7和14天时ER mRNA相对表达量分别为空白对照组的0.64倍、1.33倍、2.32倍;5μg/L B(a)P组分别为空白对照组的1.21倍、1.38倍、1.61倍;50μg/L B(a)P组分别为空白对照组的0.66倍、1.07倍、1.85倍。其中低剂量组(0.5μg/L)诱导ER转录水平上调趋势最为明显,但各诱导组与对照组相比差异并不显著(P>0.05)。相比于双齿围沙蚕ER转录水平的微弱变化,B(a)P诱导下双齿围沙蚕VTG转录水平与对照组相比都呈现明显的诱导上调趋势。在0.5μg/L B(a)P暴露组中VTG mRNA相对表达量随着诱导时间的延长呈现先上升后下降再上升的趋势,而在5μg/L B(a)P和50μg/L B(a)P暴露组中VTG的转录水平随诱导时间呈现先上升后下降的趋势。