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尖锐湿疣（condyloma acuminatum,CA）是感染 HPV（human papillomavirus,HPV）所导致的性传播疾病。感染高危型HPV的CA,病程长,发生持续感染的可能性更大,且复发率高,存在癌变风险。CA发病的重要环节是上皮角质形成细胞的过度增殖产生疣体。中药复方杠柳液治疗尖锐湿疣在临床应用数十年,有效率高,能有效降低复发,且不良反应少。但其作用机制尚不明确,需要进一步探索。本课题拟从如下两个方面进行研究:（1）复方杠柳液对HeLa细胞增殖的作用机制研究;（2）复方杠柳液治疗尖锐湿疣的网络药理学研究。研究一复方杠柳液对HeLa细胞增殖的作用机制研究目的:观察复方杠柳液对HPV 18+人宫颈癌细胞株HeLa增殖的影响,探究相关分子机制。方法:（1）通过采用不同浓度复方杠柳液处理HeLa 24h、48h和72h后,运用CCK-8方法检测HeLa细胞活力,并计算复方杠柳液影响HeLa细胞活力的IC50值,为后续实验提供参考浓度。（2）采用160μg/mL的复方杠柳液浓度,分别干预HeLa细胞0h、24h和48h,运用碘化丙啶对HeLa细胞染色后,用流式细胞仪对DNA含量进行测定,分析HeLa所处细胞周期的分布。（3）设置空白组和复方杠柳液160μg/mL组,运用CFSE荧光标记检测细胞分裂速率,对HeLa细胞干预0h、24h和48h后,分别检测0h、24h和48h时的荧光强度,并计算24h和48h荧光强度与0h荧光强度的比值。（4）分别采用80μg/mL、160μg/mL复方杠柳液浓度,对HeLa进行短时间（5min、15min、30min、60min、180min）和长时间（12h）干预,利用 Western Blot方法对HPV癌蛋白E7、细胞周期依赖蛋白激酶1（cyclin dependent kinase 1,CDK1/cdc2）、细胞周期蛋白B（cyclin B1）的蛋白表达进行检测。结果:（1）复方杠柳液可以抑制HeLa细胞增殖,呈时间和剂量依赖性,48h的IC50值为160μg/mL,选择80μg/mL和160μg/mL作为后续实验给药浓度。（2）复方杠柳液可以使处于S和G2/M期的HeLa细胞增多,呈时间依赖性。（3）复方杠柳液可以降低HeLa细胞分裂速率,复方杠柳液160μg/mL组的荧光强度比在处理24h显著高于对照组,在48h的增高更为明显。（4）复方杠柳液造成E7蛋白表达降低,CDK1活性抑制,呈时间和剂量依赖性。结论:复方杠柳液可以抑制HeLa细胞增殖,造成S和G2/M期周期阻滞,作用机制可能与E7癌蛋白表达降低,以及CDK1活性抑制相关。研究二复方杠柳液治疗尖锐湿疣的网络药理学研究目的:借助网络药理学方法预测复方杠柳液治疗CA有效成分和作用靶点。方法:（1）运用 TCMSP、ETCM、PharmMapper、SwissTargetPrediction 数据库检索复方杠柳液活性成分并预测相关靶标,在DisGeNET、GeneCards数据库检索并预测CA的相关靶标,将复方杠柳液靶标和CA靶标整理去除重复项后取交集,得出生物信息数据库的复方杠柳液治疗CA靶标。经UniProt数据库人类物种确认,标准化基因名。并利用Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶标网络图。（2）将药物活性成分和复方杠柳液治疗CA靶标导入Cytoscape软件,构建药物-活性成分-交集靶标-疾病网络图,根据度值筛选关键活性成分。（3）将复方杠柳液治疗CA靶标导入至String数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,将结果导入Cytoscape软件,利用Analyzer工具对复方杠柳液治疗CA靶标进行拓扑分析,根据度值筛选出蛋白质互作网络中的关键靶标。（4）将复方杠柳液治疗CA靶标导入Metascape数据库进行GO:cellular component（CC）、molecular function（MF）、biological process（BP）和 KEGG富集分析。结果:（1）4个药物在相关数据库分别预测到163、114、105、539个复方杠柳液靶标,合并去除重复后共得到610个。2个疾病相关数据库分别预测到340、16个CA靶标,合并去除重复项后为346个。复方杠柳液与CA靶标取交集得到59个复方杠柳液治疗CA的靶标。（2）根据78个药物活性成分与复方杠柳液治疗CA靶标的网络参数,筛选出复方杠柳液治疗CA的关键活性成分,其中前2位分别是熊果酸（ursolic acid）、β-谷甾醇（beta-sitosterol）。（3）根据59个靶标网络拓扑参数筛选出复方杠柳液治疗CA的关键靶标,其中前8位依次为α-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（RAC-alpha serine/threonine-protein kinase,AKT1）、细胞肿瘤抗原 p53（Cellular tumor antigen p53,TP53）、原癌基因酪氨酸蛋白激酶（Proto-oncogene tyrosine-protein kinase Src,SRC）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF）、表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）、白蛋白（Albumin,ABL）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL6）、血管内皮生长因子 A（Vascular endothelial growth factor,AVEGFA）。（4）复方杠柳液治疗CA靶标富集分析显示,排名较高通路涉及蛋白质的磷酸化调控（positive regulation of protein phosphorylation）、含磷酸基团的转移酶复合物（transferase complex,transferring phosphorus-containing groups）、磷酸转移酶活性（Transferring-containing groups）、癌症相关通路（Pathways in cancer）、EGFR 酪氨酸激酶抑制剂耐药性通路（EGFR tyrosine kinase inhibitor resistance）、细胞周期（Cell cycle）通路。结论:复方杠柳液治疗CA的过程中,熊果酸、β-谷甾醇活性成分可能发挥着重要作用,AKT1是潜在的治疗靶标,这与蛋白激酶磷酸化调控、EGFR赖氨酸激酶抑制剂抗性通路和细胞周期密切相关。