论文部分内容阅读
背景:目前,肿瘤的治疗方法还是以手术、放疗、化疗三大传统手段为主,但这三大传统手段均存在各自的缺点,生物治疗做为第四种手段日益受到重视,并已经应用到临床。过继性免疫治疗是生物治疗的一个重要分支,它是将对疾病有免疫力的供者的免疫应答产物(如抗体、小分子免疫肽和免疫效应细胞)转移给其他个体,或自体细胞经过体外处理后回输自身,产生治疗作用的免疫疗法。CIK细胞是过继性免疫治疗的生力军。与其他抗肿瘤药物相比,它可以在没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下,直接杀伤肿瘤细胞,并且调节和增强机体的免疫功能。目前,肿瘤患者自体外周血CIK细胞治疗技术已广泛用于临床,并且取得了一定疗效。但总的看来,自体CIK治疗效果不尽令人满意,有效率在30%左右。究其原因可能是“肿瘤免疫编辑”所致,该理论认为,机体免疫系统在杀伤肿瘤的同时,也促进了肿瘤的恶性发展,导致了恶性肿瘤的免疫逃逸,或免疫细胞对肿瘤的免疫耐受。其结果导致肿瘤的发生,发展和复发。也就是说自身的免疫系统对自身的肿瘤细胞失去了杀伤作用,是肿瘤难治的主要原因。我们在“肿瘤免疫编辑”理论的启示下,用同种异体(健康人)的CIK细胞治疗其他治疗方法(包括自体CIK细胞疗法)均失败的晚期肿瘤患者,有些取得了出乎预料的好效果。为了给这项新颖技术的临床应用提供相应的理论基础和临床依据,我们对健康人和肿瘤患者来源的CIK细胞的生物学特性及健康人CIK细胞的临床应用进行了相应研究。目的:比较健康人和肿瘤患者外周血来源的CIK细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性;观察健康人CIK细胞对裸鼠体内移植瘤的预防和治疗作用;观察健康人CIK细胞对晚期肿瘤患者的临床治疗作用。研究方法:第一部分:健康人和肿瘤患者外周血来源的CIK细胞的体外扩增速度、细胞表型和杀伤活性1. CIK细胞的诱导:常规无菌采集健康人和肿瘤患者外周血各10份,采用密度-梯度离心法分离出外周血中的单个核细胞,向悬浮细胞中加入细胞因子rhIFN-γ、rhIL-2和CD3mAb,定向诱导成CIK细胞。2.直接活细胞计数法比较两者的扩增速度。3.流式细胞仪检测比较两者细胞表型。4. MTT法比较两者对K562和LOVO细胞株的杀伤活性。第二部分健康人CIK细胞对裸鼠体内移植瘤的预防作用和治疗作用1.对照组:6只裸鼠,第一天背部皮下接种A549细胞1×106/0.2ml,第二天开始在尾静脉注射生理盐水0.2ml,连续5天,观察移植瘤的生长情况。2.预防作用:6只裸鼠,第一天开始尾静脉注射CIK细胞,2×10~7个细胞/0.2ml,连续5天,第6天背部皮下接种A549细胞1×10~6个细胞/0.2ml,观察移植瘤生长情况。3.治疗作用:18只裸鼠,每只裸鼠于第一天接种A549细胞1×10~6/0.2ml,次日,分为3组,每组6只,均连续治疗5天,观察移植瘤的生长情况。第一组:局部(接种A549部位)注射CIK细胞2×10~7/0.2ml;第二组:尾静脉注射CIK细胞2×10~7/0.2ml;第三组:局部(接种A549部位)及尾静脉各注射CIK细胞2×10~7/0.2ml。3.四周后处死裸鼠,测量肿瘤大小,称重,计算肿瘤体积,抑瘤率,并做病理检查。第三部分:健康人CIK细胞对晚期肿瘤患者的临床治疗作用。选取12例接受CIK细胞过继性免疫治疗的晚期肿瘤患者,采用自身对照法比较治疗前后患者症状、KPS评分、疗效以及PBMC对K562杀伤活性的变化。结果:第一部分:健康人外周血来源的CIK细胞的扩增速度显著高于肿瘤患者外周血来源的CIK细胞(P < 0.05);流式细胞仪检测显示健康人外周血来源的CIK细胞CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞百分比显著高于患者外周血来源的CIK细胞(P < 0.05);健康人外周血来源的CIK细胞对K562,LOVO的杀伤活性强于患者外周血来源的CIK细胞(P < 0.05)。第二部分:生理盐水对照组各裸鼠背部皮下移植瘤出现较早,并且以相近速率快速生长,体积较大;CIK细胞预防组及治疗组中局部注射组和尾静脉注射组的移植瘤出现较晚,生长较慢,体积较小,联合治疗组治疗效果更佳(P < 0.05)。第三部分:临床上CIK细胞治疗12例其他疗法失败的晚期肿瘤患者,11例临床症状改善,8例KPS评分提高,疗效CR2例,PR3例,MR2例,SD1例,PD4例,有效率(CR+PR+MR)为58.3%,PBMC对K562细胞株的杀伤活性提高16.47%。结论:1.体外实验中,健康人外周血来源的CIK细胞体外扩增快, CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例高,对肿瘤细胞的杀伤活性强于肿瘤患者外周血来源CIK细胞。2.动物实验中,健康人CIK细胞对裸鼠移植瘤有预防和治疗作用。3.临床研究资料表明:健康人来源的CIK细胞对其他疗法无效,包括自体CIK细胞治疗失败的肿瘤患者仍有一定疗效,主要表现在肿瘤缩小或消失,自我症状改善,KPS评分提高,自体PBMC杀伤活性增强。