PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用研究

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目的:研究磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)信号通路对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的PC12细胞凋亡状态的影响;探讨PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的下游相关信号分子及其表达变化规律。 方法:应用PLC-γ1特异性抑制剂U73122预处理H2O2诱导的PC12细胞以阻断PLC-γ1信号通路,Hoechst/PI双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变,Western blot技术半定量PLC-γ1信号通路下游相关信号分子bcl-2及caspase-3的表达及其变化规律。 结果:H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效关系。PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达到35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带。Western blot结果提示50μM H2O2处理可引起caspase-3蛋白呈现出时间依赖性的表达下调,而对bcl-2蛋白表达无明显影响;在10μM U73122预处理的PC12细胞中,可见明显的bcl-2和caspase-3蛋白表达的下调,且caspase-3表达的下调也表现出时间依赖性。 结论:PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用。bcl-2和caspase-3两个信号分子可能与H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的PLC-γ1信号通路有关,并作为下游信号分子,参与PLC-γ1信号通路在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的凋亡抑制作用。
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