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目的本研究通过脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞的炎症模型,观察一氧化氮(NO)、炎性细胞因子TNF-α、IL-6、金属蛋白酶-9(MMP-9)和NF-κB的含量与表达,探讨丹酚酸A(SAA)对炎性损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法分离纯化小鼠腹腔巨噬细胞后,随机分为五组。对照组;LPS刺激组(10μg/ml LPS刺激);高、中、低浓度药物组(10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml三种浓度丹酚酸A + 10μg/ml LPS)。分别进行以下实验:用Griess法测定巨噬细胞上清液中一氧化氮(NO)的含量;放射免疫法测定上清液中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;用明胶酶谱法测定上清液中金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;用免疫印迹(Western-blot)法测定细胞胞浆和胞核中一氧化氮合酶(iNOS)和NF-κB(P65)的表达。结果1.与对照组相比,LPS刺激巨噬细胞后,释放的NO、IL-6和TNF-α含量明显增高(P<0.01),高、中、低(10μg/ml,1μg/ml,0.1μg/ml)浓度的SAA与LPS刺激的巨噬细胞共同孵育后,对巨噬细胞释放的NO、IL-6和TNF-α具有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。2.与对照组相比, LPS刺激巨噬细胞后,细胞胞浆内的iNOS和MMP-9表达明显增高(P<0.01),高、中、低浓度的SAA与LPS刺激的巨噬细胞共同孵育后,对巨噬细胞胞浆内的iNOS和MMP-9具有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。3.与对照组相比,LPS刺激巨噬细胞后,细胞胞核内的NF-κB(P65)表达明显增高(P<0.01),高浓度的SAA与LPS刺激的巨噬细胞共同孵育后,对巨噬细胞胞核内的NF-κB(P65)具有明显的抑制作用(P<0.01)。结论1.小鼠腹腔巨噬细胞经LPS刺激后,可引起明显的炎性损伤,表现为NO、iNOS、炎性细胞因子IL-6和TNF-α含量与对照组相比显著增高。2.用丹酚酸A预处理后,可有效的减少巨噬细胞炎性损伤的程度,表现为NO、iNOS、IL-6和TNF-α含量与LPS刺激组相比明显降低,说明丹酚酸A通过减少这些炎症因子的释放来抑制LPS诱导的炎症损伤。3.巨噬细胞经LPS刺激后,NF-κB的活性显著升高,用丹酚酸A预处理后NF-κB的活性降低,说明丹酚酸A通过抑制NF-κB的活性来发挥其抗炎的作用,并且通过影响NF-κB的活性而调控NO、iNOS、IL-6和TNF-α的表达。4.巨噬细胞经过LPS刺激后,MMP-9表达明显增加,与NF-κB表达相平行,应用丹酚酸A后,MMP-9的表达也随之显著降低,提示促进MMP-9的表达是NF-кB在炎症损伤的作用机制之一,丹酚酸A可通过NF-кB的炎症通路抑制MMP-9的释放,从而发挥其对机体的保护作用。