第一部分:甲状腺乳头状癌及其淋巴结转移的常规超声特征、超声造影和弹性成像研究研究背景和目的甲状腺癌是常见的恶性肿瘤之一,甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)占了全部甲状腺癌的80%-90%,而乳头状癌包括经典型、滤泡亚型、高细胞亚型等多种亚型;甲状腺癌最常见转移部位是颈部淋巴结,转移率高达50%~70%。超声检查是评估甲状腺异常的主要方法,超声检查的应用使甲状腺癌的临床检出率逐渐上升,同时超声还能对可疑转移性淋巴结进行检测和术前定位。超声造影和弹性成像在判断甲状腺癌淋巴结转移方面也具有重要的应用价值。因此,本研究将对甲状腺乳头状癌亚型及其颈部淋巴结转移的超声特征、超声造影和弹性成像进行分析,评估甲状腺乳头状癌各亚型超声特征的区别以及利用超声特征、超声造影和弹性成像判断超声诊断甲状腺癌淋巴结转移的准确性。研究方法1.选取2014年9月至2016年12月在河南省肿瘤医院(郑州大学附属肿瘤医院)经病理诊断为PTC并行手术切除的患者为研究对象,再选取包含三种常见亚型(经典型、滤泡型和高细胞型)的患者178例,其中男性40例,女性138例,经病理诊断为颈部淋巴结转移的患者66例,未发生转移的患者112例。收集患者的临床和影像资料,包括年龄、性别、肿瘤大小、手术方式、TNM分期和超声特征。2.统计分析PTC各亚型(经典型、滤泡型和高细胞型)患者的临床资料的差异;分析各亚型患者超声特征。3.对照病理结果,评价超声特征、超声造影和弹性成像诊断甲状腺癌淋巴结的准确性。研究结果1.178例样本中,经典型、滤泡型和高细胞型PTC分别为124(69.7%)、35(19.7%)和19(10.6%)例,各亚型患者之间的临床基本资料无统计学差异。2.超声检查显示各亚型之间的边缘特征和内部结构有差异,且滤泡型的患者的甲状腺结节边缘更趋向于规则,而经典型和高细胞型则趋向于不规则,不规则比例分别为42.9%、54.8%和78.9%(P<0.05);经典型和高细胞型的实性的内部结构比例高于滤泡型,实性和主要实性的比例分别为85.5%、73.7%和68.6%(P<0.05);其他超声特征无统计学差异。3.超声检查显示颈部淋巴结转移与未转移超声特征中的大小、纵横比、钙化、血流分布有差异(P<0.05),而内部结构、回声、边缘以及晕圈在两组之间无统计学差别。4.超声特征诊断淋巴结转移的灵敏度为72.7%,特异度为91.1%,阳性预测值为82.8%,阴性预测值为85.0%;超声造影诊断淋巴结转移的灵敏度为75.7%,特异度为92.0%,阳性预测值为84.7%,阴性预测值为86.6%;弹性成像技术诊断淋巴结转移的灵敏度为78.8%,特异度为92.0%,阳性预测值为85.2%,阴性预测值为88.0%。研究结论1.甲状腺乳头状癌各亚型之间的内部结构回声和形态边缘特征存在差异2.超声特征、超声造影和弹性成像技术对甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移的诊断具有很高的应用价值。第二部分:甲状腺乳头状癌及其淋巴结转移的BRAF和NRAS突变分析研究背景和目的BRAF突变在PTC中是比较常见的突变,BRAF突变会导致MAPK信号通路的的异常激活,这在PTC的发生发展中扮演了重要的角色。近些年来,许多的研究表明PTC患者中BRAF突变的出现与PTC的病理特征和不良预后有关。NRAS突变在PTC患者中的突变频率低于BRAF突变,但有研究发现NRAS突变在PTC中的比例高达30%,可见NRAS突变对PTC的发生发展也有很重要的作用。检测基因突变常用的标本为组织标本,但随着液态活检技术的兴起,利用血液或者其它体液来对癌症患者进行筛查、诊断、以及预后判断已经得到了越来越广泛的应用。因此,本研究的目的旨在检测PTC各亚型患者组织和血液中BRAF和NRAS突变,评估各亚型患者之间的基因变异的差别,同时分析淋巴结转移和未转移患者之间BRAF和NRAS突变的差异。从而为诊断PTC淋巴结转移提供可靠的生物标志物;通过对比血液和组织的结果来探讨无创性的血液突变检测替代组织突变检测的可行性。研究方法1.以第一部分的178例PTC患者为研究对象,术前收集患者的血液样本10ml并分离获得血浆,术后收集患者的组织标本。2.收集标本后提取样本的DNA并进行微滴式数字PCR(dd PCR)检测,检测的突变信息包括BRAF的3个突变位点以及NRAS的6个突变位点。3.统计所有样本的组织和血液突变位点检测结果,分析PTC各亚型患者BRAF和NRAS突变信息的差异;分析淋巴结转移与未转移患者突变信息的差异。4.对比血浆和组织检测的结果,分析血浆和组织检测的一致性。5.对淋巴结的超声特征与基因突变结果进行相关性分析,同时评估超声检查联合基因突变诊断PTC淋巴结转移的准确性。研究结果1.178例PTC患者中,组织中检测到BRAF突变的样本数为74例(41.6%),NRAS突变的样本数为21例(11.8%);血浆中检测到BRAF突变样本数为41例(23.0%),NRAS突变数为13例(7.3%);血浆和组织的检测结果中,突变一致性为0.28,野生型一致性为0.33,突变不一致为0.39。2.血浆和组织检测结果均显示各亚型之间BRAF突变存在差异(P<0.05),而NRAS突变无明显统计学差异。3.淋巴结转移与未转移PTC患者之间BRAF突变和NRAS突变均存在差异,淋巴结转移的患者中BRAF和NRAS的突变比例更高(BRAF:62.2%vs 19.2%P<0.01;NRAS:61.9%vs 33.8%P<0.05);BRAF突变、NARS突变均与患者的TNM分期有关,晚期的PTC患者BRAF突变和NRAS突变的比例更高(BRAF:51.4%vs 22.1%P<0.01;NRAS:33.3%vs 12.7%P<0.05)。4.BRAF突变与PTC结节大小有关(P<0.05),与其它超声特征无明显相关;NARAS突变与PTC超声特征无统计学相关。5.超声特征联合血浆BRAF突变与NRAS突变检测诊断PTC淋巴结转移的灵敏度为84.8%,特异度为92.9%,阳性预测值为87.5%,阴性预测值为91.2%。研究结论1.BRAF突变、NRAS突变均与PTC亚型、淋巴结转移及TNM分期有关。2.血浆和组织中BRAF与NRAS检测结果一致性为0.61,血浆基因突变检测具有一定的应用价值。3.超声特征联合血浆BRAF突变以及NARS突变信息比单独的超声特征诊断PTC淋巴结转移的准确性更高