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动脉粥样硬化(AS)是一种复杂的心血管内膜病变,包括单核细胞粘附内皮细胞并穿过内皮间隙进入内膜下层、动脉中膜的平滑肌细胞(SMC)迁入内膜进而增生形成纤维斑块等病理过程。反式脂肪酸(TFA)作为一种独立的促心血管疾病因子越来越受到重视。近年来许多研究表明TFA与动脉粥样硬化的发生发展息息相关,但大多聚焦于TFA对血管内皮细胞的影响,TFA对血管平滑肌细胞的作用未见相关报道,并且国内外研究主要用反式脂肪酸的混合物作为研究主体,很少分别研究两种不同饱和度反式脂肪酸对心血管疾病的影响。近年有学者发现广泛存在于中国日常膳食中的反油酸(9t18:1)和反亚油酸(9t12t18:2)能通过Caspase途径诱导血管内皮细胞凋亡、促进内膜炎性因子释放,流行病学证据已经证实这两种TFA的致AS作用具有显著差异。因此,为了探究9t18:1和9t12t18:2对心血管平滑肌细胞的影响及其机制,本研究采用流式细胞术(FACS)、W_estern-Blot、荧光定量PCR等分子生物学手段来观察9t18:1和9t12t18:2对平滑肌细胞活力和功能的影响,为进一步探明TFA与AS的关系提供科学数据。本研究首先采用MTT法观察不同浓度9t18:1和9t12t18:2对平滑肌细胞活力的影响;通过流式细胞术检测TFA对细胞周期的影响;进一步通过荧光定量PCR和Western-Blot分析TFA对p21、CDK2、CyclinE、PCNA等细胞周期相关基因和蛋白表达量的影响,探讨TFA促平滑肌细胞增殖进而诱导AS发生的机制;再运用高效气相色谱法分析TFA对平滑肌细胞脂肪酸组成的影响;最后通过内皮和平滑肌细胞的联合培养,观察TFA对联合培养条件下内皮细胞的功能影响。主要取得如下研究成果:1.低浓度的9t18:1和9t12t18:2均能促进平滑肌细胞增殖,且50μM9t18:1和20μM9t12t18:2促增殖作用最强(48h细胞存活率与对照组相比分别达到114.30±0.6%和118.5±0.57%),而100μM以上9t18:1和50μM以上9t12t18:2对平滑肌细胞具有毒性,促进细胞凋亡。2.TFA降低平滑肌细胞内多不饱和脂肪酸(PUFA)含量,特别是n-3PUFA,且9t12t18:2作用强于9t18:1;对饱和脂肪酸含量没有影响,随着TFA在细胞培养液中浓度的增加,细胞内TFA含量明显增加。3.两种TFA均能引起平滑肌细胞周期改变。20,50μmol/L9t18:1和5,20μmol/L9t12t18:2均能促进平滑肌细胞由G0/G1期进入S期,使处于增殖期的细胞数量百分比明显增加;当9t18:1浓度在50μmol/L时S期细胞数量由对照组的3.4±0.2%增加到27.7±0.7%,而20μmol/L的9t12t18:2使S期的细胞数升高到25.8±2.8%。平滑肌细胞由正常的收缩型细胞形态进入合成分化型,促进AS的病理发展。4.两种不同饱和度的反式脂肪酸都能增加CDK2、CyclinE和PCNA基因mRNA和蛋白质的表达量,但抑制p21基因的表达。5.TFA促进与SMC紧密接触联合培养的内皮细胞表达ICAM-1、ECAM-1、 eNOS等炎症因子;但当SMC与EC只有旁分泌信号交流时,TFA的这种促炎症作用不明显。