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研究背景:肝癌是人类常见的恶性肿瘤之一,其致死率排恶性肿瘤第二位,外科治疗是目前最常规、最被广泛接受的治疗手段,但是术后患者复发率高,生存期短,尽管随着新的医疗手段,如射频消融术、介入栓塞术及分子靶向药物药物的出现,使得肝癌的患者的生存期提高,但是肝癌治疗的效果仍然不理想,肝癌侵袭转移能力较强是导致肝癌患者生存周期短的一个重要的因素,因此对肝癌的肝癌侵袭转移的具体机制的研究,则显得尤为重要。肿瘤的发生往往伴随着基因突变,导致抑癌基因的表达抑制,促癌基因激活,基因的突变则必然伴随着基因结构的改变,但是近几年随着人们对表观遗传学研究的深入,发现在基因结构的不改变的情况下也就可以诱发肿瘤,即表观遗传修饰的改变,导致了某种基因转录受到抑制,基因的表观修饰主要包括DNA甲基化及去甲基化、组蛋白乙酰化及去乙酰化等方面,表观遗传学为肿瘤的研究及治疗提供新的方向,在胃癌、肠癌等消化系统实体肿瘤中发现,表观遗传改变可以导致基因的染色体组的不稳定性,进而促进了肿瘤的形成,针对表观遗传修饰改变,也开发出相关药物,疗效显著,因此进一步研究表观遗传修饰在肝癌发生发展过程中具体的作用则显得尤为重要。SUZ12是PRC2复合体的亚基,PRC2这在表观遗传的修饰中占有重要的作用,可以调节组蛋白H3的27位点上的酪氨酸三甲基化,PRC2可以抑制人类胚胎成纤维细胞中1000多种基因的转录。目前在肺癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌发现SUZ12能促进肿瘤的增殖与侵袭转移[1-3]在恶性胶质瘤中研究发现SUZ12基因在肿瘤中表达缺失,该基因的缺失导致肿瘤细胞转化,具有肿瘤细胞特性[4,5]。目前研究发现SUZ12在乙肝相关性肝癌中,随着HBV的复制,PX的作用下SUZ12与ZNF189基因表达下调,导致肿瘤干细胞标志基因BAMBI,CCND2,DKK2,DLK1,EpCAM表达上调,而在未转染PX基因中,这些标记基因则没有显著差异[6]。SUZ12与ZNF198的表达下调则促进了HBX的复制与正常肝细胞向肿瘤细胞转化。SUZ12与ZNF198的表达的下降,伴随着HOTAIR与PLK1的表达的上调,引起组蛋白修饰的改变[7]。因此SUZ12对肝癌的发生发展的有着非常重要的意义。但是关于SUZ12对肝癌细胞的增殖、侵袭转移的影响及其具体机制目前还不明确。研究目的:研究SUZ12在肝癌中表达情况,并研究其在肝癌侵袭转移中的作用及其分子机制方法:1、收集肝癌标本,用western blot的方法检查SUZ12在肝癌中的表达情况,并使用统计学明确其相关。2、购置组织芯片,使用IHC技术研究SUZ12在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况,并研究SUZ12与肿瘤患者的术后生存期的关系,并做统计分析。3、使用慢病毒,构建SUZ12稳定干扰肝癌细胞株,及SUZ12稳定过表达细胞株,使用transwell技术检测干扰SUZ12基因表达后,肿瘤细胞Hep3b、SMMC-7721侵袭迁移的变化,及过表达SUZ12后肿瘤细胞系Hep3b、SMMC-7721的迁移与侵袭能力的变化。并使用western blot技术检测干扰与过表达后细胞系Hep3b、SMMC-7721中的E-CADHERN、N-cadhern、Vimatin、MMP-9、MMP-2、P-ERK1/2蛋白的变化4、使用MTT及EDU实验技术检测SUZ12干扰及过表达对肝癌细胞株Hep3b、SMMC-7721细胞株的增殖能力的影响,检测SUZ12稳定干扰及过表达对肝癌细胞的克隆形成的影响。5、验证ERK信号通路在SUZ12缺失诱导肝癌细胞的侵袭、迁移能力变化中的作用,使用ERK信号通路抑制剂阻滞相关信号通路,检测SUZ12稳定干扰细胞系的侵袭与转移的变化及相应的E-cadhern、N-cadhern、Vimatin、MMP-9、MMP-2、P-ERK1/2蛋白的变化。结果:30例肝癌标本中有20例患者的肿瘤组织中的SUZ12较其癌旁组织下降,组织芯片技术发现SUZ12的降低可以显著降低肿瘤患者的术后生存周期,体外实验发现干扰SUZ12表达后肝癌细胞系的侵袭与转移的能力显著增强,干扰SUZ12表达后肝癌细胞系Hep3b、SMMC-7721的N-cadhern蛋白显著降低、金属基质酶MMP-9、MMP-2显著升高,过表达SUZ12后则呈现相反的趋势,干扰肿瘤细胞系Hep3b、SMMC-7721后肝癌细胞的P-ERK1/2显著升高,使用P-ERK1/2抑制剂后SUZ12稳定干扰细胞株的迁移、侵袭能力能够的显著的抑制,P-ERK1/2抑制剂能够逆转SUZ12稳定干扰细胞株中的N-CADHERN、金属基质酶MMP-9、MMP-2的蛋白变化。但是在MTT实验、EDU实验中发现SUZ12的干扰及过表达对肿瘤细胞系Hep3b、SMMC-7721的增殖、克隆形成实验无显著影响结论:1、SUZ12在肝癌细胞中呈低表达、SUZ12的降低的肝癌患者其生存周期明显短于SUZ12未明显变化及SUZ12升高的患者。2、SUZ12的缺失及过表达对肝癌细胞株Hep3b、SMMC-7721的增殖能力无显著影响3、SUZ12的缺失促进了P-ERK1/2的磷酸化,激活ERK信号通路,并促进了肝癌细胞系Hep3b、SMMC-7721的迁移、侵袭