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目的:通过检测细胞凋亡学指数、sirt1及其介导的sirt1/Runx2通路和sirt1/PPARγ通路在大鼠肌腱病中的表达,探究肌腱病的发生机制,并观察郑氏一号新伤药对肌腱病大鼠模型的防治效果,为该药的临床使用提供理论依据。方法:将72只雄性Wistar大鼠随机分为K组(空白对照组),T组(单纯跳跃组)和F组(敷药跳跃组),每组再按取材时间点随机分为4周组,6周组,8周组,每组8只。K组自然喂养,T组、F组采用“电击跳跃法”造模,且F组从第4周开始外敷郑氏一号新伤药干预。观察大鼠一般情况(毛发、神态、体力状况等)和有效跳跃次数后,分别于第4、6、8周末取跟腱组织,HE染色观察组织形态学变化,Tunel法检测细胞凋亡指数,PCR及Western Bolt法检测大鼠跟腱内去乙酰化酶sirt1、转录调节因子Runx2和PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果:1.大体情况观察:大体观察:K组大鼠一般情况良好,造模组(T组、F组)大鼠跳跃后表现为神态倦怠,皮毛凌乱,体力下降,但F组优于T组。2.有效跳跃次数:造模组(T组、F组)跳跃过程中整体呈下降趋势,且F组优于T组,在4~7周存在显著性差异。3.HE染色组织形态学观察:K组4、6、8周腱纤维均呈波状排列,无明显差异。第4周,T、F组腱纤维排列紊乱,部分表现成骨细胞与脂肪细胞略有增多。第6周,与第4周相比,T组排列紊乱,成骨与脂肪细胞稍有增多;F组腱纤维排列轻微紊乱、稀疏,成骨细胞与脂肪细胞未见明显变化。第8周,与第6周相比,T组部分纤维断裂,成骨细胞与脂肪细胞明显增多;F组成骨细胞与脂肪细胞未见明显变化。4.细胞凋亡学检测:(1)组内分析:K组、F组从第4周到第8周整体呈下降趋势,T组呈缓慢上升趋势。K组、T组组内无显著性差异,P>0.05;F组内第4周与第8周间存在显著性差异,P<0.05。(2)组间分析:第4周,K组、F组均与T组间存在显著性差异,P<0.05;K、T组在第6周,K组、F组与T组在8周出现显著性差异,P<0.05。除4周T组与F组细胞凋亡指数基本相同但显著高于K组外,6、8周T组均显著高于K组和F组。5.sirt1的表达结果:(1)mRNA:(1)组内分析:4~8周时,T组呈现先下降后上升的趋势。T组与F组均在第6周与第8周间出现显著新差异,P<0.05。(2)组间分析:三组间均不存在显著性差异,P>0.05。(2)蛋白表达:(1)组内分析:4~8周时,T组呈现先下降后上升的趋势。三组内均不存在显著性差异,P>0.05,(2)组间分析:第8周时,K、T组之间存在显著性差异,P<0.05。且在4、6、8周时T组均高于F组和K组。6.PPARγ的表达结果(1)mRNA:(1)组内分析:4~8周时,T呈整体上升,K、F组保持基本不变的趋势。T组内4周与8周间存在显著性差异,P<0.05。K、F组内不存在显著性,P>0.05。(2)组间分析:第4周时,T组、F组间存在显著性差异,P<0.05。第6周时,K组、T组间存在显著性差异,P<0.05。第8周时,K、F组与T组间均存在显著性差异,P<0.05,且T组在4、6、8周时均高于K、F组。(2)蛋白表达:(1)组内分析:4~8周时,T呈整体上升趋势,K、F组变化不明显。三组内均不存在显著性差异,P>0.05。(2)组间分析:第8周时,K、F组与T组之间均存在显著性差异,P<0.05。且4、6、8周时三组表达情况T组最高,F组次之,K组最低。7.Runx2的表达结果(1)mRNA:(1)组内分析:T组内第6周与第8周间存在显著性差异,P<0.05。(2)组间分析:6、8周时,K、T组均之间存在显著性差异。4、6、8周时T组在三组中最高。(2)蛋白表达:(1)组内分析:4~8周时,T呈整体上升趋势,K、T、F三组内均不存在显著性差异,P>0.05。(2)组间分析:第8周时,K、F组与T组间均存在显著性差异,P<0.05,且4、6、8周时三组表达情况T组最高。结论:1腱细胞凋亡可影响肌腱病的形成,随着腱细胞凋亡加剧,腱病不断加重。2在肌腱病形成过程中可发现sirt1的高表达,且通过Sirt1/Runx2通路影响肌腱病进程中的骨化进程,通过Sirt1/PPARγ通路影响肌腱病进程中的脂肪化进程。3外敷郑氏一号新伤药可有效延缓大鼠肌腱病的发生发展进程,其机制与抑制肌腱细胞凋亡、降低Runx2表达抑制骨化和降低PPARγ表达抑制脂肪化进程有关。