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骨肉瘤是高度恶性的骨原发性肿瘤,由于辅助化疗和辅助放疗的应用,其5年生存率已由20年前的20%提高到50%～65%。放疗是临床治疗肿瘤最常用的方法之一,但有些肿瘤,如骨肉瘤对常规X射线、γ射线不敏感,在正常组织耐受限度内,巨型肿瘤及晚期肿瘤放疗效果较差,有必要寻找一种新的射线以有效地提高肿瘤局部控制率及患者生存率,目前最有希望的射线之一就是中子射线。并且,在放射线杀伤肿瘤细胞的同时,不可避免地会引起正常组织的损伤。因此,探寻增加肿瘤放射敏感性和放射效应的措施成为放射肿瘤学一个非常重要的课题。基因治疗能在增强放射治疗的效应的同时减少放疗的副作用,基因治疗与放疗相结合(基因放疗)是肿瘤治疗学领域一种非常重要的发展趋势。DNA损伤修复基因,脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/ apyrimidinic endonuclease, APE1),又称氧化还原因子(redox factor-1,ref-1),具有抗细胞凋亡的功能,是低氧诱导细胞凋亡的重要保护因子,推测与肿瘤放射抗拒有关。RNA干扰(RNAi)技术阻断基因表达具有高稳定、高效率和高特异的特点,完全有可能作为一种新的分子生物学工具成为肿瘤基因治疗的新手段。通过RNAi技术敲低(knock down)肿瘤中APE1/ref-1的表达,以期提高放疗的敏感性。本项目应用MTT法、克隆形成分析和碱性彗星分析法检测骨肉瘤细胞受照射后的细胞存活率、形成克隆的能力以及DNA单链损伤情况,并用流式细胞仪检测细胞凋亡,分析放射线对骨肉瘤细胞的杀伤作用。应用RNAi技术,将pSilence APE1质粒转染入骨肉瘤细胞,敲低其APE1基因的表达,探讨APE1 siRNA对锎-252中子射线的增敏作用。通过裸鼠荷瘤实验,荷瘤生长曲线观察和免疫组化等技术,探讨敲低APE1在骨肉瘤细胞的表达对增加放疗敏感性的作用。研究目的1.探讨锎-252中子射线和铱-192γ射线对HOS细胞的放射敏感性;2.敲低DNA损伤修复基因APE1在HOS细胞中的表达,同时探讨其对锎-252中子射线的放射增敏作用;3.通过肿瘤生长、病理组织学以及免疫组化等技术,观察pSilence APE1对放射