甘薯蛋白Sporamin抗肿瘤效果研究

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甘薯原产南美洲,由于其高产稳产并具有抗干旱、耐瘠薄、适应性强、营养丰富等特点,在我国大量的种植,产量仅次于水稻、小麦和玉米,占世界甘薯产量的80%以上(约1.2亿吨)。甘薯除含丰富的淀粉和糖类外,其块根中一般还含有1.2-10g/100g干物质的蛋白质,而Sporamin为其中主要的储藏蛋白并于1985年被Maeshima发现。研究表明Sporamin具有消除DPPH自由基和羟基自由基的活性,此外,Sporamin还是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,有研究表明其同结构的胰蛋白酶抑制剂具有抗肿瘤作用,但是Sporamin的抗肿瘤作用还无人研究。本试验采用硫酸铵沉淀法制备得到粗蛋白;将粗蛋白用阴离子交换(DEAE-52)和凝胶层析(Serphedex G-75)纯化得到Sporamin。再利用得到的纯品Sporamin进行抗肿瘤细胞试验;利用得到的粗蛋白进行抗肿瘤动物试验。细胞试验中采用MTT法测定了不同浓度的Sporamin(0、0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5mg/ml)对人体结肠癌细胞系SW480细胞的增殖抑制效果,并用台盼蓝拒染法对其细胞毒性进行了评价,最后采用transwell小室和ECM550侵袭试剂盒分别对不同浓度Sporamin(0、0.02、0.2、1mg/ml)对SW480细胞的迁移和侵袭的影响进行了测定。结果表明,Sporamin在1mg/ml浓度下无细胞毒性产生。在0.05mg/ml时即可抑制SW480细胞的增殖,且抑制具有剂量依赖性。在浓度大于0.02mg/ml时就能抑制SW480细胞的侵袭,在浓度大于0.2mg/ml时,能抑制SW480细胞的迁移,且两者均具有剂量依赖性。动物试验采用腹腔注射(50mg/kg体重)和灌胃(2g/kg体重)Sporamin的方式来治疗人结肠癌HCT-8腹膜弥散型转移模型裸鼠,结果表明,Sporamin能降低裸鼠的瘤重,减少裸鼠血液中的癌胚抗原(CEA)含量以及腹水的产生,能减轻腹膜弥散型转移模型裸鼠的瘤重、腹水等肿瘤负担,且腹腔注射给药效果更佳;采用腹腔注射(50mg/kg体重)和灌胃(3g/kg体重)Sporamin的方式来治疗自发性lewis肺癌肺转移模型小鼠,结果表明,Sporamin能降低c57模型小鼠的瘤重,抑制肺转移的产生。最后采用MTT法研究了1mg/ml具有不同胰蛋白酶抑制剂活性的Sporamin(分别于70℃、90℃、100℃及127℃处理30分钟,对照组为正常Sporamin)对SW480的增殖抑制效果,结果表明,Sporamin对SW480细胞的增殖抑制率没有随着Sporamin的活性丧失而减小,Sporamin对SW480的增殖的抑制可能与Sporamin的胰蛋白酶抑制剂活性无直接关系。本试验首次用细胞和动物试验证实了Sporamin具有抗肿瘤效果。Sporamin在甘薯加工产业中常常伴随着加工废水的排放而流失,明确Sporamin的抗肿瘤效果将为Sporamin蛋白的开发和利用提供依据。
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