攀枝花块菌多糖的提取、纯化及抗氧化活性研究

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块菌作为一种稀有食用真菌,具有丰富的营养和优越的保健功能。本研究选用中国”块菌之乡”攀枝花出产的块菌,采用现代提取、分离技术提取块菌中的多糖,采用木瓜蛋白酶和大孔树脂AB-8对所得粗多糖中的杂质蛋白质、色素进行纯化分离,研究了攀枝花块菌多糖的体外抗氧化性能,主要研究内容和结论如下:1.系统比较了四种不同类型的方法提取块菌中多糖,在单因素试验的基础上,利用Box-Benhnken中心组合试验,以多糖提取率和多糖含量同为响应值对四种提取方法进行工艺条件的响应面优化。结果表明:传统热水浸提法的最佳工艺参数为提取温度为90℃、提取时间为60min、料液比为33:1,在该条件下多糖理论提取率为13.45%,理论含量为70.75%,验证得实际提取率为13.32%,实际含量71.55%;酶法辅助提取法的最佳工艺条件为酶解时间65min、酶解温度61℃、酶用量1.6%、pH为5.6,多糖理论提取率为15.00%,理论含量为74.19%,实际提取率为14.31%,实际含量74.96%;超声波辅助提取法的最佳工艺条件为超声波时间36min、超声波温度50℃、液料比40:1、超声波功率140W,多糖的理论提取率为18.42%,实际提取率为18.15%,理论含量为74.70%,实际含量71.04%;超声波协同酶法提取的最优工艺条件为超声波功率140W、超声波时间27min、pH值6.4、酶解时间20min,多糖的理论提取率为21.11%,实际提取率为20.91%;理论含量为71.93%,实际含量72.70%。超声波协同酶法的多糖提取率比单独使用生物酶或者超声波都高,是热水浸提的1.6倍。因此,超声波协同酶法提取块菌多糖效果最佳。2.通过比较TCA法、Sevage法、酶结合Sevage法三种方法的脱蛋白效果,以蛋白脱除率和多糖回收率为指标,得到最佳脱蛋白方法是酶结合Sevage法。在单因素试验的基础上进行响应面优化,其最佳的脱蛋白条件为酶解时间2h、氯仿:正丁醇(v/v)为5.6:1、振摇时间20min,蛋白脱除率为73.16%,多糖回收率为85.47%。3.选用AB-8、X-5、D101三种大孔树脂和活性炭、硅藻土、活性炭+硅藻土、高岭土、双氧水共八种不同的处理进行脱色试验,通过比较脱色率和多糖回收率最后选取AB-8大孔树脂吸附进行脱色试验。在单因素试验的基础上进行响应面优化,得到最优工艺条件为脱色温度40℃、摇床转速170r/min、脱色时间5h,脱色率为76.02%,多糖回收率为84.23%。4.块菌粗多糖TIP脱蛋白和脱色处理后透析除杂和超滤离心,得到块菌多糖TIP-Ⅲ(分子质量>100KD)、TIP-Ⅱ (100KD>分子质量>50KD)、TIP-Ⅰ(分子质量<50KD)。5.通过五种不同的体系(总还原能力、羟自由基·OH, DPPH·、超氧阴离子O2-·、螯合金属离子)研究了块菌粗多糖及其不同组分的抗氧化性能。结果表明块菌多糖具有较强的抗氧化能力,其能力的大小与多糖质量浓度存在正相关性;清除自由基的能力依次为TIP-Ⅲ>TIP-Ⅱ>TIP-Ⅰ>TIP,表明大分子质量的块菌多糖的抗氧化活性强于低分子质量的块菌多糖。
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