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目的:对子宫内膜癌Ishikawa细胞用氯化钴进行缺氧处理后,通过实验组的HIF-1α过表达组、HIF-1α-siRNA组与对照单纯缺氧组,分析缺氧诱导因子HIF-1α以及上皮间质转化相关因子的表达,来探讨HIF-1α在子宫内膜癌上皮间质转化过程中的作用。在对子宫内膜癌Ishikawa细胞用氯化钴进行缺氧处理后,分析雌激素对缺氧诱导因子HIF-1α以及上皮间质转化相关因子的表达的影响,探讨雌激素在子宫内膜癌Ishikawa细胞缺氧状态下的作用。同时,通过雌激素干预的HIF-1α过表达组、雌激素干预HIF-1α-siRNA组与单纯雌激素对照组作比较,分析在缺氧状态,雌激素干预的情况下缺氧诱导因子HIF-1α和上皮间质转化EMT相关因子的表达,探讨雌激素与HIF-1α在子宫内膜癌中上皮间质转化过程的相互作用及意义。方法:通过使用氯化钴这一化学方法,模拟低氧环境,对子宫内膜癌Ishikawa细胞进行缺氧预处理。采用细胞瞬时转染的方式通过Lipo2000试剂将HIF-1α过表达质粒和HIF-1α-siRNA组转染进子宫内膜癌Ishikawa细胞内。对细胞进行培养后,分别提取RNA和蛋白以进行实时荧光定量PCR和Western Blot实验。子宫内膜癌Ishikawa细胞缺氧预处理后,分别设置（1）单纯缺氧组、HIF-1α过表达组、siRNA-NC组（沉默对照）、HIF-1α-siRNA组（沉默组）;（2）Estrogen（雌激素）组、Estrogen（雌激素）+HIF-1α过表达组、Estrogen（雌激素）+siRNA-NC组（沉默对照）、Estrogen（雌激素）+HIF-1α-siRNA组（沉默组）。采用荧光PCR方法以及Western Blot的实验方法,检测Ishikawa细胞上皮间质转化相关基因的mRNA和蛋白的表达情况。结果:1.荧光定量PCR结果:在缺氧的环境下,相比对照单纯缺氧组,HIF-1α在HIF-1α过表达组、Estrogen（雌激素）组表达水平显著升高（P<0.01）,在HIF-1α-siRNA组（沉默组）HIF-1α表达水平下降（P<0.01）。上皮间质转化相关因子E-cadherin在HIF-1α过表达组、Estrogen（雌激素）组表达水平均下降（P<0.01）,在HIF-1α-siRNA组（沉默组）的E-cadherin表达水平明显上升（P<0.01）。β-catenin、N-cadherin、TGF-β1在HIF-1α过表达组、Estrogen（雌激素）组均有升高（P<0.01）,在HIF-1α-siRNA组（沉默组）的表达水平均有下降（P<0.01）。在缺氧环境下,相比对照单纯雌激素干预组,HIF-1α在Estrogen（雌激素）+HIF-1α过表达组表达水平显著升高（P<0.01）,在Estrogen（雌激素）+HIF-1α-siRNA组（沉默组）的HIF-1α表达水平下降（P<0.01）。上皮间质转化相关因子E-cadherin在Estrogen（雌激素）+HIF-1α过表达组表达水平显著下降（P<0.01）,在Estrogen（雌激素）+HIF-1α-siRNA组（沉默组）E-cadherin的表达水平显著上升（P<0.01）。β-catenin、N-cadherin、TGF-β1在Estrogen（雌激素）+HIF-1α过表达组的表达水平均显著上升（P<0.01）,在Estrogen（雌激素）+HIF-1α-siRNA组（沉默组）的表达水平均显著下降（P<0.01）。2.免疫蛋白印迹法（Western Blot）实验结果:在缺氧环境下,相比对照单纯缺氧组,HIF-1α在HIF-1α过表达组的蛋白表达水平明显上升（P<0.01）,但在HIF-1α沉默组蛋白表达水平明显下降（P<0.01）;上皮间质转化相关因子E-cadherin在HIF-1α过表达组的蛋白表达水平下降（P<0.05）,在HIF-1 α沉默组蛋白表达水平明显上升（P<0.01）;β-catenin（P<0.05）、N-cadherin（P<0.01）、TGF-β1（P<0.01）在HIF-1α过表达组明显上升,在HIF-1 α沉默组蛋白表达水平均有明显下降（P<0.01）。在缺氧环境下,相比对照单纯雌激素干预组,HIF-1α在Estrogen（雌激素）+HIF-1α过表达组的蛋白表达水平上升（P<0.05）,但在Estrogen（雌激素）+HIF-1α沉默组蛋白表达水平明显下降（P<0.01）;上皮间质转化相关因子E-cadherin在Estrogen（雌激素）+HIF-1α过表达组的蛋白表达水平下降（P<0.05）,在Estrogen（雌激素）+HIF-1α-siRNA（沉默组）蛋白表达水平明显上升（P<0.01）。β-catenin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.01）、TGF-β1 在 Estrogen（雌激素）+HIF-1α 过表达组明显上升;β-catenin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）、TGF-β1（P<0.01）在 Estrogen（雌激素）+HIF-1α-siRNA沉默组的蛋白表达水平明显下降。结论:1.实时荧光定量RT-PCR结果、免疫蛋白印迹法结果均显示:HIF-1α的表达水平在单纯缺氧组、HIF-1α过表达组均上调,在HIF-1α-siRNA沉默组表达水平下调。提示子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞在缺氧环境中HIF-1α被激活,表达水平升高,HIF-1α参与了缺氧状态下子宫内膜癌的发病过程。2.实时荧光定量RT-PCR结果、免疫蛋白印迹法结果显示:缺氧预处理后,HIF-1α的表达水平在单纯雌激素组表达水平升高,提示Estrogen（雌激素）参与了缺氧过程,对HIF-1α起到正向调节作用。说明雌激素在子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞缺氧状态下激活HIF-1α这一过程中是起到了促进作用。3.缺氧状态下,在子宫内膜癌细胞中通过对缺氧诱导因子HIF-1α分别进行基因过表达和基因沉默,上皮间质相关因子E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、TGF-β1的表达水平也随之发生相应的改变,提示缺氧环境下子宫内膜癌可能存在上皮间质转化过程。在缺氧基础上对子宫内膜癌细胞进行雌激素干预,再通过对缺氧诱导因子HIF-1α分别进行基因过表达和基因沉默,上皮间质相关因子表达水平的改变提示雌激素可能通过与HIF-1α相互作用促进子宫内膜癌的上皮间质转化过程,共同促进子宫内膜癌的发生发展。