【摘 要】
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为有效防制因斑点叉尾鮰病毒等病毒性疾病引起的感染性疾病,本研究利用毕赤酵母表达系统对斑点叉尾鮰α干扰素基因（IFN-α）进行了表达和活性检测。 本实验根据斑点叉尾鮰IFN-α的核苷酸序列（EU783919）以及该基因的酶切图谱和表达载体多克隆位点的分析,设计并合成一对引物P1、P2,在上游引物P1中加入XhoⅠ限制性内切酶酶切位点,在下游引物P2中加入NotⅠ限制性内切酶酶切位点。从原核
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为有效防制因斑点叉尾鮰病毒等病毒性疾病引起的感染性疾病,本研究利用毕赤酵母表达系统对斑点叉尾鮰α干扰素基因（IFN-α）进行了表达和活性检测。 本实验根据斑点叉尾鮰IFN-α的核苷酸序列（EU783919）以及该基因的酶切图谱和表达载体多克隆位点的分析,设计并合成一对引物P1、P2,在上游引物P1中加入XhoⅠ限制性内切酶酶切位点,在下游引物P2中加入NotⅠ限制性内切酶酶切位点。从原核重组表达质粒中扩增斑点叉尾鮰IFN-α完整的开放阅读框（ORF）,扩增长度为492bp。目的片段与表达载体pPICZαA都经过XhoⅠ/NotⅠ双酶切后,连接转化大肠杆菌DH5α,得到真核重组表达质粒pPICZα-IFN-α,并送Invitrogen公司测序鉴定,确定目的基因完整ORF已经正确插入真核表达载体pPICZαA。 重组表达质粒pPICZαA-IFN-α通过SacⅠ单酶切、电泳,纯化回收酶切产物。电转化感受态的毕赤酵母工程菌X33,转化后涂布含Zeocin培养基,于28℃培养4-5d,获得多个单菌落,筛选具有高抗性的转化子。先用BMGY培养基（含甘油）激活培养约24h,OD260值达2.7和3.4时,收集菌液,250r/min诱导表达。每24h添加一次甲醇,保持甲醇终浓度为1%,进行诱导表达。诱导表达后,在不同时间阶段收集菌液,离心、取上清。将不同时间段收集的上清液进行SDS-PAGE电泳分析,可发现有清晰的蛋白条带。将上述甲醇诱导表达后的上清液,进行无菌检验并稀释成不同浓度,利用细胞攻毒后的病变,初步判断干扰素的生物活性。 结果显示本研究成功在毕赤酵母中表达出斑点叉尾鮰IFN-α,该表达蛋白能够干扰VSV病毒在CCO上的作用,表明该蛋白在预防和治疗斑点叉尾鮰病毒性疾病方面有潜在的应用价值。
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栈桥工程在海洋经济发展中发挥着重要作用,但目前我国采用栈桥施工方式不仅无法满足日益增长的使用需求,同时施工速度较慢,不利于海洋资源开发及海洋环境保护。据此,本文研究了近海岸钢栈桥悬臂顶推施工技术,此种方法可提升海洋工程施工质量。结合实际工程案例,分析了悬臂顶推施工过程中的技术问题。建立了波-流耦合数值模型,获得了波、流作用下钢管桩的时程响应。建立了考虑接触的施工多尺度有限元模型,据此,优化了悬臂顶
本文主要以物理知识在生活中的巧妙运用为重点进行阐述,结合当下高中物理基础知识和理论为依据,从热学物理知识、光学物理知识、力学物理知识三个方面在日常生活中的巧妙运用,深入说明并探讨相关物理知识,旨意在为相关研究提供参考资料。
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花鳞草属Anthosachne是大洋洲的特有植物,是禾本科小麦族中一个重要的多年生属,含有St、Y、W三个染色体组。物种形成上,花鳞草属是由含w染色体组的澳洲冰草属与主要分布在亚洲含StY染色体组的鹅观草属的物种杂交形成的异源六倍体。按照现代遗传系统学的原则,花鳞草属只含有Anthosachne rectisetus与Anthosachne scaber两个种的独立属。但是现在也有学者把花鳞草属划
高分子量谷蛋白是麦类作物种子胚乳中重要的贮藏蛋白之一,其组成和含量可直接影响小麦面粉的加工品质。本文利用对赖草属物种的HMW-GS进行了SDS-PAGE分析、克隆测序以及原核表达研究,主要结果如下： 1.赖草属物种的HMW-GS组成分析 在4个四倍体赖草属物种的6份材料中,检测到1-3条HMW-GS带,通过与含Ns基因组二倍体新麦草物种的HMW-Gs比较,认为检测到的HMW-GS由赖草
相比于已经实用化的Nb3Sn超导材料,Nb3Al有着更优异的超导性能和更好的应力应变容许特性,具有很大的应用潜力。Nb,Al和Cu高温会生成不超导的三元化合物,因此青铜法并不适合于Nb3Al超导体的制备。由低温扩散方式制备的A15相Nb3Al中Al含量较低,超导性能欠佳。高性能的Nb3Al可以由RHQT（快热急冷转变法）的方式制备。在RHQT工艺中,Nb/Al前驱体在2 s之内加热到1900℃左右
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Bisabosqual A是从葡萄穗霉（Stachybotrys sp.RF-7260）中分离的一个杂萜类天然产物,对来自酿酒酵母菌、白色念珠菌、大鼠肝脏和人体肝癌细胞的角鲨烯合成酶均有抑制作用;由于角鲨烯合成酶抑制剂可抑制人体内胆固醇的合成,故其对于抗高胆固醇血症药物的研究也有一定意义。此外,Bisabosqual A的分子结构复杂,由没药烷型倍半萜和苯酚结构组合而成,体现为顺式稠合的四环体系和
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