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[目的]考察DC-Chol和DOTAP在脂质体成膜前或成膜后不同阶段加入所制备的阳离子脂质体的理化性质及免疫原性,筛选DC-Chol和DOTAP修饰脂质体疫苗的最佳制备方法,筛选修饰脂质体的DC-Chol和DOTAP的最佳用量;筛选SA在在脂质体成膜前加入所制备的阳离子脂质体的理化性质及免疫原性,筛选SA修饰脂质体的最佳用量。[方法]采用薄膜分散联合冻融-冻干法分别制备中性脂质体、DC-Chol成膜前加入脂质体(DC-Chol剂量分别为250μg/鼠、500μg/鼠、750μg/鼠、900μg/鼠)、DOTAP成膜前加入脂质体(DOTAP剂量分别为450μg/鼠、600 μg/鼠、900 μg/鼠),腹腔免疫小鼠,以MTT法为指标,以单因素方差分析确定两种不同阳离子所修饰脂质体的最佳修饰用量;在最佳修饰用量的基础上,分别制备DC-Chol成膜前加入脂质体、DC-Chol成膜后加入脂质体、DOTAP成膜前加入脂质体、DOTAP成膜后加入脂质体,腹腔免疫小鼠,进行MTT实验,以单因素方差分析确定两种不同阳离子所修饰脂质体的最佳制备方法;以SA为电荷修饰物,采用薄膜分散联合冻融-冻干法分别制备SA与大豆磷脂摩尔比为2%、3%、4%、5%、10%的脂质体冻干粉,进行MTT实验,以单因素方差分析确定SA修饰流感疫苗脂质体冻干粉的最佳用量;以激光粒度仪分别测定两种阳离子最佳制备方法和最佳修饰用量制备的脂质体疫苗的粒径和电位。以筛选出的最佳修饰用量和最佳制备方法制备脂质体,设计实验,分别免疫小鼠,于第7d、14d、28d通过MTT实验检测脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪检测T淋巴细胞表面标记实验来考察其免疫原性。[结果]通过MTT实验,采用单因素方差分析确定了两种阳离子修饰脂质体疫苗的最佳制备方法为成膜后加入法,DC-Chol修饰脂质体的最佳用量为50Oμg/鼠,成膜后加入DC-Chol修饰的脂质体平均粒径约为2.2μm,zeta电位约为18.9mV;DOTAP修饰脂质体的最佳用量为600μg/鼠,成膜后加入DOTAP修饰的脂质体平均粒径约为2.2μm,zeta电位约为17.9mV;脂质体成膜前加入SA修饰脂质体的最佳用量为2%(摩尔比),所制备的脂质体平均粒径约为733.9nm,zeta电位约为13.2mV。免疫相同周期时,脂质体成膜后加DOTAP和DC-Chol组分别与中性脂质体组、非脂质体疫苗原液组、PBS阴性对照组比较,P<0.05,有显著性差异,说明脂质体成膜水化后加入DOTAP或DC-Chol制得的阳离子脂质体疫苗免疫原性强于中性脂质体疫苗;脂质体成膜水化后加入DOTAP组与脂质体成膜水化后加入DC-Chol组进行组间比较,P>0.05,无显著性差异,说明两种阳离子脂质体免疫原性一致。[结论]成膜前或成膜后加入阳离子对两种阳离子修饰的流感疫苗脂质体冻干粉的免疫原性并无显著性影响,但为加强实验过程的可操作性和简易性,选择成膜后加入阳离子作为制备阳离子修饰脂质体的最佳方法;DC-Chol修饰脂质体的最佳用量为500 μg/鼠;DOTAP修饰脂质体的最佳用量为600μg/鼠;在7d、14d、28d的免疫周期内,7d时疫苗对小鼠脾淋巴细胞的刺激指数最高;在14d、28d时,阳离子修饰的脂质体疫苗对小鼠脾淋巴细胞的刺激指数稍有降低,但与中性脂质体7d时的免疫原性一致,仍能诱导较强的细胞免疫。