论文部分内容阅读
目的通过模拟新生鼠常压窒息模型,用三七总皂甙(PNS)干预常压窒息模型新生大鼠,通过检测脑组织细胞凋亡率及脑细胞内脑源性神经营养因子(BDNF)的变化,探讨三七总皂甙对缺氧缺血性脑损伤是否具有保护作用,同时观察细胞凋亡率及BDNF在新生鼠窒息后的变化特点,探讨PNS是否通过增加BDNF的表达、降低脑细胞凋亡率对窒息后脑组织发挥保护作用,并了解PNS治疗窒息后脑损伤的有效时间窗,从而验证一定浓度的PNS对缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为临床指导新生儿窒息致缺氧缺血性脑损伤的诊断和治疗寻求新的理论基础。方法取7日龄新生大鼠88只,随机分为3组(对照组、常压窒息模型+生理盐水组、常压窒息模型+PNS干预组),对照组8只,余每组40只:对照组(Ⅰ组),仅将新生大鼠置于同样磨口瓶中,模拟新生鼠常压窒息过程,不塞瓶塞(不做窒息处理);常压窒息模型+生理盐水组(Ⅱ组),又分为Ⅱ1、 Ⅱ2、 Ⅱ3、Ⅱ4Ⅱ5组(分别为窒息+腹腔注射生理盐水后6h、24h、48h、72h、7d,每组8只),模拟新生鼠常压窒息模型后即刻给予生理盐水(同Ⅲ组PNS等量)腹腔注射,后每隔12小时重复腹腔注射相同剂量生理盐水;常压窒息模型+PNS干预组(Ⅲ组),又分为Ⅲ1、Ⅲ2、 Ⅲ3、 Ⅲ4、 Ⅲ5、组(分别为窒息+腹腔注射PNS后6h、24h、48h、72h、7d,每组8只),模拟新生鼠常压窒息模型后即刻给予PNS100mg/kg腹腔注射,后每隔12小时重复腹腔注射相同剂量PNS液。Ⅰ组新生鼠一次性处死,Ⅱ组和Ⅲ组新生鼠分别于窒息后6小时,24小时,48小时,72小时,7天分批取脑组织,按相应步骤进行固定、石蜡包埋等制成石蜡切片,行HE染色观察脑组织的病理变化,行TUNEL法及免疫组化法测定脑细胞凋亡率及BDNF的水平,最后应用卡方检验、配对样本t检验等统计学方法进行数据分析。结果(1)Ⅰ组与Ⅱ组相比,Ⅱ组细胞凋亡率和BDNF的水平明显增高(P<0.05)且Ⅱ组不同时间点细胞凋亡率和BDNF表达的水平从6小时至48小时为上升趋势,在48小时达高峰,BDNF含量于3天时显著下降,7天时恢复正常;细胞凋亡率持续时间较长,7天时仍高于正常。(2)Ⅲ组与Ⅱ组相比,Ⅲ组细胞凋亡率较Ⅱ组低,Ⅲ1组除外(P>0.05),Ⅲ组BDNF含量也明显高于Ⅱ组(P<0.05),Ⅲ组细胞凋亡率及BDNF的表达于7天时均未恢复正常。(3)Ⅲ组与I组相比,细胞凋亡率及BDNF表达水平明显增高(P<0.05),在48小时达高峰,于7天后未恢复正常。结论(1)三七总皂甙对窒息导致的新生鼠缺氧缺血性脑损伤具有显著的保护作用。(2)在窒息所致缺氧缺血性脑损伤时,BDNF水平在48小时达高峰,未进行PNS干预时,BDNF于7天左右恢复正常;但细胞凋亡率在7天时仍高于正常对照组,说明PNS治疗窒息导致的缺氧缺血损伤应延续至7天以后。总之,本实验结果显示,100mg/kg三七总皂甙可增加窒息所致缺氧缺血性脑损伤时BDNF的表达,两者共同作用,降低神经细胞凋亡率,对窒息导致的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有一定的保护作用,且药物干预至少应维持到窒息后7天,甚至更久。