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脂联素(Adiponectin,ADPN)表达水平的降低与乳腺癌、前列腺癌、胃癌等的发生存在负相关,血浆ADPN水平可以作为肿瘤发生的一个重要检测指标。体外研究报道,ADPN能抑制乳腺癌和前列腺癌细胞的生长。而有关ADPN作用于宫颈癌的研究尚未报道,本文探讨ADPN对宫颈癌Hela细胞生长的影响。为了获得重组人ADPN基因及有活性的ADPN蛋白产物,我们根据ADPNcDNA序列设计并合成9条寡聚核苷酸片段,经重叠PCR技术获得重组人ADPN基因。构建pET-22b(+)/ADPN表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果发现目的蛋白以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。表达产物通过Ni2+-NTA柱纯化,透析法进行复性,SDS-PAGE分析显示,其分子量约为30kDa,与预期结果一致。MTT实验显示,我们表达的重组人ADPN具有抑制人内皮细胞生长的活性。为了检测ADPN对肿瘤细胞作用机制,我们采用FITC荧光标记法和RT-PCR检测MGC-803、BGC-823、HT-29和Hela细胞中ADPN受体表达情况,MTT法检测ADPN对这些细胞株的生长影响,流式细胞仪分析ADPN对Hela细胞周期影响,RT-PCR检测ADPN对细胞周期因子和凋亡基因表达影响,Western blotting分析AMPK磷酸化情况,结果表明这些癌细胞都表达ADPN受体,ADPN对Hela细胞敏感,0.1μg/mL时就能抑制其生长,10μg/mLADPN能诱导其发生凋亡。ADPN下调细胞周期正面调节子cyclin-D1和c-myc的表达,上调p21WAF1/CIP1和肿瘤抑制子p53的表达,使细胞停留在G0/G1期。ADPN上调凋亡基因Bax的表达,下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,诱导Hela细胞发生凋亡。ADPN在5~30min内使AMPK发生磷酸化,调节Hela细胞生长。本文成功构建了ADPN基因,建立了高效的原核表达系统和蛋白纯化方法,发现ADPN结合其受体,下调细胞周期正面调节子cyclinD1和c-myc的表达,上调p21WAF1/CIP1和肿瘤抑制子P53的表达抑制Hela细胞的生长,并诱导Hela细胞发生凋亡。这些研究工作为进一步探讨ADPN的抗肿瘤机制奠定了基础。