本试验目的是探索体外成熟培养过程中猪卵母细胞GV期和MⅡ期透明带蛋白泛素化水平以及PSMD4对透明带蛋白泛素化的影响,探讨猪卵透明带蛋白泛素化在精卵结合中的作用,为降低多精入卵提高猪精子生育力提供理论基础和参考依据。从而,通过了解猪卵母细胞的生物学特性,优化卵母细胞体外培养技术、体外受精技术等辅助生殖技术,避免卵母细胞体外培养对透明带泛素化水平的影响导致的一些安全问题。本试验主要采用SDS-PAGE、Western blot等试验方法对不同处理的猪卵母细胞透明带蛋白样品进行分析,试验结果如下：GV期与MⅡ期猪卵母细胞透明带蛋白(ZP)免疫印迹结果显示约65 kDa、85 kDa和120 kDa处发生不同程度的泛素化标记,且泛素化条带的灰度值都差异显著,表明猪卵母细胞体外成熟过程中透明带蛋白均发生不同程度的泛素化。成熟培养液中添加PSMD4抗体对猪卵母细胞透明带蛋白影响的免疫印迹结果显示在120 kDa处,未添加PSMD4抗体组标记出泛素化蛋白ZP1,而添加PSMD4抗体组未标记出泛素化蛋白ZP1,两组65 kDa、85 kDa处均标记出的不同程度的泛素化。对条带进行灰度值分析发现,两组的条带灰度值差异显著。说明ZP1蛋白在PSMD4抗体的参与下未发生泛素化,而ZP2、ZP3泛素化水平下降。不同培养时间的猪卵母细胞透明带蛋白(ZP)免疫印迹结果显示约在65 kDa、85 kDa和120 kDa处均标记出泛素化蛋白,且52 h之后透明带泛素化程度均有所下降。说明卵母细胞成熟过程中,随着培养时间的延长,卵母细胞老化,由于游离的泛素分子减少,透明带蛋白的泛素化水平降低。