论文部分内容阅读
目的：探索SOC通道是否参与了交通来源的PM2.5引起JurkatT淋巴细胞Ca2+稳态失衡，以及Ca2+/-CaN-NFAT信号通路是否参与了交通相关的PM2.5诱导Jurkat T淋巴细胞IL-2的释放，为进一步认识来自于交通相关PM2.5可能的免疫毒性机制提供理论基础和实验依据。方法：交通来源的PM2.5对Jurkat T淋巴细胞内Ca2+浓度的影响用流式细胞仪进行检测；免疫荧光技术观察PM2.5对Jurkat T细胞胞内NFAT核移位及检测Orai1siRNA转染Jurkat T细胞的转染效率；用荧光Real time PCR和Western Blot法检测siRNA对Orai1分子的沉默效率、钙调磷酸酶（CaN）及转录因子1（NFAT1）mRNA和蛋白表达水平分别；PM2.5刺激Jurkat T淋巴细胞后的IL-2释放水平使用ELISA法进行测定。结果：1.用SuperFect Transfection Reagent转染JurkatT细胞24h、48h、72h后，在转染24h和48h后，Orai1siRNA2组和Orai1siRNA3组的Orai1mRNA和Orai1蛋白表达水平低于（Orai1siRNA1）阴性对照组，差别有统计学意义（P <0.05）,但是以siRNA2组在转染48h后的抑制效果更加明显,但在72h转染时间段与对照组之间比较无显著性差异（P>0.05）。2.胞内Ca2+浓度在100μg/mL PM2.5刺激3h达到最高，PM2.5刺激24h后，细胞内Ca2+浓度最低；同时，用OraisiRNA转染Jurkat T细胞48h之后，再以同样的浓度刺激Jurkat T细胞3h、6h、24h之后，细胞内钙离子浓度明显低于100μg/mLPM2.5染毒组（P <0.05），并以24h最为明显。3.在静息和激活态，分别用100μg/mLPM2.5刺激Jurkat T淋巴细胞3h-24h后，与生理盐水对照组比较，在两种情况下，PM2.5均能够引起CaN转录水平上升（P<0.05）。当加入拮抗剂EGTA和CSA后，100μg/mL PM2.5刺激组的CaN转录水平出现一定的抑制，（P <0.05）。4.以100μg/mLPM2.5刺激Jurkat T细胞3h-24h后，在静息态下，PM2.5能诱导细胞内NFAT的转录水平上升，与生理盐水比较差异显著（P <0.05），但仅在24h刺激时间段，发现细胞内NFAT蛋白表达水平和生理盐水对照组比较有差异（P <0.05）。当加入拮抗剂EGTA和CSA后，在激活态下，100μg/mL组的NFAT转录水平和24h染毒时间段NFAT蛋白水平受到了一定的抑制（P <0.05）。在激活状态下，三个染毒时间段，PM2.5均能诱导细胞内NFAT转录水平和蛋白表达水平上升，与生理盐水比较差异显著（P <0.05），添加拮抗剂EGTA和CSA后，100μg/mL PM2.5剂量组的NFAT转录水平和NFAT蛋白水平出现一定的抑制（P <0.05）。5.静息态和活化的Jurkat T细胞被PM2.5（100μg/mL）刺激3h-24h后，IL-2释放水平随着染毒时间延长而降低，且较生理盐水组低（P <0.05）。当添加EGTA和CSA之后，PM2.5诱导产生的IL-2释放水平得到有效的抑制，并以激活态更加显著（P <0.05）。结论：交通相关PM2.5能使Jurkat T细胞内的Ca2+浓度失衡，胞内SOC通道参与了钙内流；交通相关的PM2.5能诱导Junket T淋巴细胞的IL-2的释放；交通相关PM2.5通过Ca2+/-CaN-NFAT信号通路调控IL-2的释放。