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我国是世界牦牛拥有量最多的国家,但牦牛的生长周期长,繁殖性能远远低于其他牛种,这限制了牦牛畜牧业经济的进一步发展。跨膜蛋白18(TMEM18)是一个末端为低聚嘧啶的基因,该基因与动物生长发育和繁殖性能密切相关。鉴于此,本研究对有关牦牛TMEM18基因多态性及其功能的进行研究。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测了TMEM18在牦牛不同组织中mRNA和蛋白的表达情况,并利用免疫组织化学染色技术对牦牛不同组织中TMEM18蛋白定位;以192头牦牛血样DNA构建混合池,扩增TMEM18基因内含子1和外显子5的序列。运用高分辨率熔解曲线分析技术(high resolution melting curve,HRM)统计基因型分型以及运用SPSS 21.0分析基因多态位点与生产性能关联;在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入TMEM18基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-TMEM18,用脂质体技术转染牦牛胎儿成纤维细胞。利用蛋白免疫印迹法、荧光定量PCR技术检测牦牛胎儿成纤维细胞转染前后TMEM18基因的表达量。研究结果如下:(1)TMEM18蛋白在牦牛各组织器官中均有表达,其中睾丸中mRNA和蛋白表达量极显著高于其他组织(P<0.01);在牦牛心肌细胞、肝细胞、脾脏红髓、脾小梁、肺终末细支气管、肺腺体、肺平滑肌、肾脏皮质肾小管、骨骼肌细胞及卵巢颗粒细胞中呈TMEM18阳性免疫反应;而在睾丸中精原细胞、初级精母细胞和次级精母细胞中TMEM18阳性反应明显高于其他组织(P<0.01)。(2)牦牛TMEM18基因内含子1处存在2个多态位点,分别是:861(A/G)和1267(C/T),外显子5处存在1个多态位点为4447(C/T)。关联分析表明,牦牛TMEM18基因861(A/G)位点的不同基因型与牦牛的体高、体重、胴体重和屠宰率差异性显著(P<0.05);1267(C/T)位点的不同基因型与牦牛的体高、体重和屠宰率差异性显著(P<0.05),而牦牛TMEM18基因4447(C/T)位点的不同基因型与牦牛的体斜长、管围、胸围、体重、胴体重、净肉重、净肉率和屠宰率均存在显著性差异(P<0.05)。(3)成功构建出pIRES2-EGFP-TMEM18真核表达载体,验证发现转染成纤维细胞TMEM18蛋白和mRNA的表达量显著提高(P<0.01)。本研究初步筛选出TMEM18与牦牛生产性状相关的多态位点并成功构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-TMEM18,为今后牦牛遗传改良和克隆技术以及基因的功能研究提供基础。