论文部分内容阅读
新疆是中国主要的葡萄栽培地区,酿酒葡萄在产量占全国的1/4,因此生产的废弃物-每年生产出数以万吨产量巨大的葡萄废弃物。本研究以葡萄籽作为实验材料,采用水酶复合法提取葡萄籽原花青素,通过大孔吸附树脂、SephadexLH-20凝胶柱层析对葡萄籽提取物中的原花青素进行的纯化,以响应面分析法对纯化条件进行优化,高效液相色谱分析葡萄籽原花青素的纯度,并对纯化产物进行体外降糖活性评价。通过水酶复合方法提取葡萄籽原花青素,在单因素试验的基础上,采用响应面法建立了二次多项数学模型,并得到了最优条件:在酶用量0.8mg/g,pH5.5,酶解温度40℃,酶解时间4h,理论浸出率为71.38%,验证试验表明该条件下的实际浸出率为71.20%,与理论值相差0.18,说明该二次多项数学模型可靠。静态吸附和动态吸附试验表明,大孔树脂HPD-400对葡萄籽原花青素有较好的吸附能力。经过大孔树脂HPD-400吸附HPD-400,通过薄层色谱、HPLC确定富集相,各分离组分再经sephedaxLH-20凝胶柱纯化。sephedaxLH-20梯度洗脱后得到4个组分。组分经薄层分析,HPLC分析和红外光谱扫描,确定纯化所得的4个组分分别为儿茶素,表儿茶素,原花青素B1,原花青素表B2。对葡萄籽提取物,萃取组分,大孔树脂分离组分以及sephedaxLH-20纯化组分,进行体外抗氧化活性和蛋白质非酶糖基化抑制作用研究。结果表明:以不同极性的有机溶剂萃取葡萄籽提取物,萃取组分中乙酸乙酯部的抗氧化与非酶糖基化抑制作用均为最强;用大孔树脂分离后所得各组分中,30%乙醇洗脱组分的抗氧化活性与非酶糖基化抑制作用均高于其他分离组分;sephedaxLH-20纯化后所得到的4个单体中,总还原能力和非酶糖基化抑制作用最强的是原花青素B2;清除DPPH和OH-能力最强的是表儿茶素,其次是原花青素B2单体;纯化后各组分在抗氧化活性和非酶糖基化抑制作用都高于葡萄籽粗提取物。说明分离纯化后葡萄籽提取物的活性成分得到有效富集并且活性最高的纯化单体为葡萄籽原花青素B2。