极端嗜热厌氧纤维素菌的分离、鉴定及其分子生物学研究

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【目的】 1.从高温温泉、油井等热源地区采集的大量样品中,富集、筛选,获得特殊的高温厌氧纤维素分解菌。 2.研究分离菌株的生物学特性,如作用底物、代谢产物、纤维素酶的酶学特性。 3.将分离菌株用于纤维素(酒糟、稻草粉等)的发酵试验,研究其对稠油的乳化效果及其生长代谢对吸附原油的剥离效应,对其应用前景进行初步探索。 4.挑选一株最具代表性的分离菌株对其微生物分类地位进行研究,根据《伯杰氏细菌分类手册》(第九版)进行,并至少鉴定到属。通过16SrDNA技术对其进行系统发育分析,确定其系统发育地位。 5.分离菌株DNA文库构建 细菌培养→DNA提取→限制性内切酶消化→与载体质粒(pUC18)按9∶1比例混合→T4DNA连接酶15℃过夜→转化受体菌E.coli JM109。 6.从DNA文库中克隆纤维素酶基因 ED基因克隆子筛选:利用刚果红平板法筛选重组子。 【方法】1.从云南邦拿掌高温温泉、油井(中原油田、胜利油田)等热源地区采集的样品中,富集、筛选,获得10多株特殊的高温厌氧纤维素分解菌。 2.试管培养基、血清瓶培养基和5L发酵培养基的分装及培养均采用亨盖特(Hungate)厌氧技术。 3.采用系列稀释滚管挑单菌落技术分离纯化极端嗜热厌氧纤维素分解细
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