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蜡酯(waxesters)是由长链的脂肪酸和脂肪醇酯化形成的一种氧酯,在动物、植物、微生物中广泛存在。蜡酯是一种重要的经济油脂,可以用于精密仪器的润滑油原料以及医药、化妆品、食品工业等领域。但是商用蜡酯的来源有限,价格昂贵。本实验室盛春霞将不动杆菌的蜡酯合成酶(WS)基因和小鼠的脂酰辅酶A还原酶(FAR1)基因导入能进行光合作用的蓝藻中,培育出了能够异源合成蜡酯的转基因藻株EF113ADPⅠwax-mousefar1。本研究进一步通过代谢途径遗传改造、培养条件优化进一步提高蜡酯的产量,以加州希蒙得木的蜡酯合成酶基因代替ADPⅠwax提高蜡酯中碳链的不饱和度,并通过电镜方法观察到了细胞内的蜡酯颗粒。
本文的研究内容和结果如下:
1.遗传修饰代谢途径,提高蜡酯产量。通过在EF113ADPⅠwax-mousefar1中使醋酸激酶基因内缺失突变和蔗糖磷酸合成酶基因插入失活,切断醋酸合成和蔗糖合成途径,将蜡酯的产量从4.93%最高提高到6.55%;过量表达乙酰辅酶A羧化酶基因也使蜡酯的产量得到提高。
2.以加州希蒙得木蜡酯合成酶基因(jojobawax)代替ADPⅠwax,提高蜡酯的不饱和度。将jojobawax与mousefar1在鱼腥藻EF113藻株或EF113ackA-spsA-双基因突变藻株共表达,蜡酯的含量分别占干重的3.00%和4.40%,与EF113ADPⅠwax-mousefar1相比,蜡酯的脂肪酸链不饱和度有显著提高。
3.电镜观察细胞内蜡酯颗粒。通过电镜观察,与缺氮、缺磷处理细胞、糖原合成缺陷株细胞以及不含蜡酯合成酶基因藻株相比较,排除蓝藻颗粒体、多聚磷酸体和糖原颗粒,初步推测细胞内的蜡酯颗粒。