几种蜘蛛毒素的结构与功能研究

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:juannayuan
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敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)是最近在我国海南省发现的一种蜘蛛新种。通过阳离子交换与反相高效液相色谱层析,从该蜘蛛粗毒中纯化到两种新组分,并分别命名为敬钊缨毛蛛毒素-Ⅴ(Jingzhaotoxin-Ⅴ)和敬钊去整合素—Ⅰ(Jingzhaotin-Ⅰ)。MALDI-TOF质谱鉴定和Edman降解测序结果表明:JZTX-Ⅴ的分子量为3605.73Da,含有29个氨基酸残基;而Jingzhaotin-Ⅰ的分子量为3631.42Da,含有34个氨基酸残基。我们还采用cDNA末端快速扩增(RACE)法获得了它们的全长cDNA序列,并由此推测出JZTX-Ⅴ和Jingzhaotin-Ⅰ的前体分别含有83和66个氨基酸残基。为了更好的了解它们的结构与功能的关系,利用同源模建技术模建了敬钊缨毛蛛毒素-Ⅴ和敬钊去整合素—Ⅰ分子的三维结构。Jingzhaotin-Ⅰ是首次报道源于蜘蛛粗毒的一个含有KGD序列的去整合素。该肽拥有抗凝血活性,能够抑制ADP诱导的人血小板的聚集。在较低浓度时它能促进人的血小板聚集,而较高浓度时则抑制血小板聚集,进一步推测它的作用位点可能是血小板糖蛋白受体Ⅱb/Ⅲa。膜片钳和电压钳实验表明,JZTX-Ⅴ能够抑制大鼠背根神经节(DRG)细胞上的TTX不敏感型以及TIX敏感型钠通道,其IC50值分别是19.8和35.4nM。JZTX-Ⅴ对处于静息关闭与失活状态的TTX不敏感型与TTX敏感型钠通道均表现出非常高的亲和性。JZTX-Ⅴ能够抑制外源表达于非洲爪蟾卵母细胞上的Kv4.2钾通道(IC50值为604.2nM),但对表达的Kv1.2、Kv1.3和Kv1.4钾通道却没有影响。JZTX-Ⅴ能够引起TTX不敏感型与TTX敏感型钠通道的起始激活电压或最大峰值电流激活电压分别往去极化方向漂移约10mV,而它们的半数稳态失活电压却往超极化方向漂移约
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