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本论文分两部分，第一部分对Pirh2的生物学功能及其与原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC，以下简称肝癌)的相关性进行初步分析；第二部分对Pirh2相互作用蛋白的生物学功能进行了初步研究。 本实验室在利用酵母双杂交筛选能够与hNTKL-BP1相互作用的蛋白时，得到了Pirh2的一种新剪接本(Pirh2b)。两种剪接本所编码的蛋白质Pirh2a和Pirh2b具有不同的C端结构，都可以同p53发生相互作用，但体外泛素化实验表明Pirh2b并不具有泛素连接酶活性。10对肝癌组织样本的RT-PCR实验表明Pirh2在肝癌组织样本和癌旁组织样本中存在表达差异。为了进一步研究Pirh2与肝癌的相关性，我们针对79例肝癌的组织样本进行了real-time RT-PCR实验。结果表明Pirh2a在42例样本中呈现下调表达，占整个样本数的53％，在16例样本中呈现上调表达，占整个样本数的20％，在21例样本中不存在表达差异；Pirh2b在41例样本中呈现下调表达，占整个样本数的52％，在28例样本中呈现上调表达，占整个样本数的35％，在其余10例样本中不存在表达差异。为了进一步验证real-time RT-PCR的实验结果，我们利用Pirh2的多克隆抗体对190例肝癌病例进行组织芯片实验，结果表明Pirh2在正常肝组织中的表达水平(73％positive，139 of190tissues，P=1.839×10-11)明显高于其在肝癌组织(38％ positive，74 of190tissues)的表达水平。我们结合病例资料对实验结果进行了多种统计学分析，结果表明Pirh2a的下调表达与肿瘤分化程度具有统计学意义：在低分化的肝癌样本中下调表达更明显。 为了进一步研究Pirh2b的生物学功能，我们利用酵母双杂交方法筛选出了其相互作用蛋白AIG1(Androgen induced1)和TD26(hepatocellular carcinoma，associated gene TD26)。生物信息学分析显示AIG1含有一个信号肽和6个疏水性跨膜结构域，我们进行的细胞定位实验显示AIG1呈绕核分布。生物信息学分析显示TD26可能存在一个信号肽，可能是一种新的分泌蛋白。我们用酵母双杂交、GSTPull-down、免疫共沉淀和细胞内共定位的方法验证了Pirh2b与AIG1、Pirh2b与TD26之间特异性相互作用，同时也证明Pirh2a分别与AIG1和TD26同样存在着特异性的相互作用。由于Pirh2a是一个具有泛素连接酶E3活性的蛋白，因此这些结果提示AIG1和TD26有可能作为Pirh2a的两个新的泛素化底物。我们通过体内泛素化实验也发现Pirh2可以直接或间接的促进TD26蛋白的蛋白酶体降解。此外，我们利用real-time RT PCR的方法对AIG1和TD26与HCC的相关性进行研究，结果同样表明这两个基因在癌组织中呈现明显的下调表达。Kaplan-Meier方法分析表明AIG1与病人的术后生存期之间存在着明显的统计学意义，AIG1下调表达越明显的病人术后生存期越短。而统计学分析表明TD26的下调表达与肿瘤分化程度之间具有统计学意义：在低分化的肝癌样本中下调表达更明显。为了进一步探寻Pirh2与AIG1和TD26相互作用的生物学意义，我们对AIG1和TD26进行细胞信号通路的筛选实验，结果表明在细胞中过表达AIG1，可以明显激活NFAT-PKC信号通路，这对Pirh2与AIG1相互作用可能的生物学意义提供了线索；在细胞中过表达TD26，没有发现明显的细胞信号通路发生改变。组织表达谱分析显示TD26在肝脏中明显高表达，在肾脏，胰腺中有微弱的表达，而在脑，心脏，胎盘，肺和骨骼肌中没有检测到表达。 本论文首次对Pirh2与肝癌的相关性进行了研究，通过分析发现了Pirh2在肝癌组织中无论转录水平，还是蛋白水平都呈现下调表达，这不同于其在肺癌和前列腺癌中的表达情况，提示Pirh2可能是一种在肝癌中特异性下调表达的基因。同时筛选出两个新的与Pirh2相互作用蛋白，并对这两个蛋白同肝癌的相关性和可能参与的信号传导通路以及对细胞周期的影响进行了初步的研究。实验结果提示AIG1和TD26可能是一种新的抑癌基因，本文为进一步研究这两个基因的生物学功能奠定了基础。