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小反刍兽疫（peste des petits ruminants,PPR）是由小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）引起的一种急性、高度接触性传染病,主要感染山羊、绵羊及野生小反刍兽类,其发病率和死亡率可高达100%,严重威胁着世界养羊业的健康发展。尽管全球疫苗免疫接种计划在控制小反刍兽疫暴发流行中发挥了积极作用,亚临床和散发型病例仍时有发生,迄今尚无用于PPR治疗的药物。因此,有必要研究开发抗病毒药物用于小反刍兽疫的防治。运用分子对接技术筛选具有抗PPRV活性的绿原酸类衍生物,采用MTT法测定异绿原酸A对非洲绿猴肾细胞（Vero）的最大无毒质量浓度、半数细胞毒性(CC50);空斑形成试验测定异绿原酸A的半数有效质量浓度(EC50),计算治疗指数（TI）;采用最大无毒质量浓度以内的异绿原酸A处理感染PPRV细胞,观察细胞病变,并用MTT法测定感染细胞活性;采用免疫印迹试验、实时荧光定量PCR、空斑形成试验和间接免疫荧光试验（IFA）观察异绿原酸A对PPRV侵入、复制、增殖、分布和释放的影响。采用6-羧基-2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（乙酰氧基甲酯）（C-DCDHF-DA-AM）荧光探针、硫代巴比妥酸（TBA）比色法和羟胺比色法分别检测异绿原酸A对PPRV感染细胞内活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响;采用WB、q RT-PCR检测异绿原酸A对PPRV感染的细胞中PI3K/AKT、JAK/STAT通路以及下游信号分子表达水平的影响。结果表明:1、异绿原酸A与PPRV P蛋白的对接参数将8种绿原酸类物质（异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、奎宁酸）与PPRV P蛋白进行分子对接后,结合自由能分别为-6.0、-5.7、-5.8、-5.8、-5.8、-5.2、-5.2、-4.9 kj/mol,其中异绿原酸A对接参数最好,同P蛋白489位点的赖氨酸形成两个氢键,提示异绿原酸A可能干扰依赖RNA的RNA聚合酶复合物的组成,成为抗PPRV的候选化合物。2、异绿原酸A的抗PPRV活性异绿原酸A对Vero细胞的最大无毒质量浓度、CC50、EC50和TI分别为7.81mg/L、125.60 mg/L、21.02 mg/L和5.98;异绿原酸A处理能显著抑制PPRV诱导的细胞病变及病毒的增殖,显著提高病毒感染细胞活力（P＜0.05）;异绿原酸A处理能显著抑制PPRV侵入Vero细胞及其在宿主细胞中的增殖,病毒结构蛋白F和N基因表达水平显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;病毒宿主细胞胞浆内病毒分布明显减少;释放的子代病毒形成噬斑数量明显减少。上述结果表明异绿原酸A可通过抑制PPRV侵入、复制、增殖和释放发挥其抗病毒活性。3、异绿原酸A对PPRV感染引起的氧化应激的抑制作用PPRV感染的细胞中ROS和MDA含量显著升高（P＜0.01）;经异绿原酸A处理的PPRV感染细胞中SOD活性显著升高（P＜0.01）,ROS和MDA含量显著降低（P＜0.01）。提示异绿原酸A能显著抑制病毒感染细胞的氧化应激,提高宿主细胞活力。4、PI3K/AKT信号通路介导异绿原酸A抗PPRV活性PPRV感染Vero细胞中PI3K、AKT、p-AKT、p-GSK及下游信号分子Bax和Bcl-2表达水平均显著上调（P＜0.05或P＜0.01）,且Bax/Bcl-2比值显著提高（P＜0.05）;经异绿原酸A处理的PPRV感染细胞中PI3K、AKT表达水平显著升高（P＜0.01）,p-AKT、p-GSK水平显著下降（P＜0.01）,Bax/Bcl-2的比值显著降低（P＜0.05）。提示异绿原酸A通过调节PI3K/AKT信号通路表达促进病毒感染细胞凋亡,抑制病毒的持续感染。5、JAK/STAT信号通路介导异绿原酸A抗PPRV活性感染PPRV的Vero细胞中JAK1表达水平显著升高（P＜0.05）,p-STAT1和STAT1表达水平极显著下降（P＜0.01）;经IAA处理的感染细胞中JAK1表达水平显著下降（P＜0.05）,p-STAT1和STAT1表达水平极显著升高（P＜0.01）,下游抗病毒蛋白基因IRF9、ISG20、ISG54表达水平极显著升高（P＜0.01）,PKR表达水平极显著下降（P＜0.01）。提示异绿原酸A通过调节JAK/STAT信号通路表达,增强宿主细胞天然免疫,抑制病毒增殖。综上所述,异绿原酸A是一种潜在抗PPRV化合物。异绿原酸A能抑制PPRV感染引发的氧化应激和细胞损伤。异绿原酸A通过PI3K/AKT通路及其下游细胞凋亡相关蛋白质抗病毒蛋白Bax和Bcl-2,促进PPRV感染细胞凋亡,抑制病毒持续感染;同时,异绿原酸A通过上调JAK/STAT及其下游信号分子IRF9、ISG54和ISG20的表达水平,增强PPRV感染细胞的天然免疫力。