【摘 要】
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本论文通过改进后的方法:10﹪醋酸沉淀,15﹪硫酸钕沉淀,35﹪硫酸铵沉淀,过SephadexG-50柱,过DEAE-cellulose柱,获得不同纯化程度的G0以及纯化的G0.并且以G0、G040kD亚基分别免疫大
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本论文通过改进后的方法:10﹪醋酸沉淀,15﹪硫酸钕沉淀,35﹪硫酸铵沉淀,过SephadexG-50柱,过DEAE-cellulose柱,获得不同纯化程度的G0以及纯化的G0.并且以G0、G040kD亚基分别免疫大鼠制备G0抗体和G040kD亚基抗体.用多个纯化G0作SDS-PAGE分析,并比较各次纯化G0的比活,我们认为G0的亚基分子量有一定的波动范围;G0亚基在接近40kD,而且比较纯的情况下会表现出很高的活性:当45kD、43kD和40kD并存时,G0的比活并不高,远远低于40kD单独存在时的比活,当亚基分子量大于40kD的蛋白越少或者不存在时G0的活性越高.菜心粗蛋白和DEAE-Cellulose收集的GO作SDS-PAGE,并对G0抗体作western blot,结果显示,粗蛋白有75 kD、61kD、49kD等印迹带其中49kD为主带.DEAE-Cellulose收集的G0也出现很多印迹带,但是印迹带和粗蛋白的不同,主带约40kD.可见40kD亚基可能不是G0真正的亚基,而可能是纯化过程中由分子量大于40kD的亚基降解得到.不同纯化程度的G0进行SDS-醋酸薄膜电泳,电泳的结果显示存在分别向正极、负极泳动的蛋白.向负极泳动的蛋白的比例随着纯化程度提高而降低.SDS蛋白复合物向负极泳动是一个很不寻常的现象.
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