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沙门氏菌(Salmonella spp)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytohenes)、大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)和空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni),是引起人动物源性食物中毒最常见病原菌。此四种病原菌在自然界中广泛存在,同时也是畜禽体内的共生菌。本课题研究目的:1、建立能够快速检测动物源性食品中这四种病原菌的多重PCR方法;2、参照国标法,结合建立的多重PCR检测方法对广西南宁市售新鲜动物源性食品中四种病原菌的污染情况调查;3、对2009-2010年送检的病禽及市售新鲜动物源性食品中检出的沙门氏菌进行血清型鉴定,分析动物源性食品检出的沙门氏菌的可能污染来源。
参考空肠弯曲杆菌、大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌的保守序列,设计相应的引物,优化反应条件,建立了检测此四种病原菌的多重PCR方法。该方法的特异性试验表明,四对引物只能扩增各自对应的病原菌DNA片段,而对其它非目标病原菌则无扩增。
2009年至2010年间采集广西南宁市6个农贸市场及3个超市零售的新鲜动物源性食品(包括牛肉、猪肉、鸡肉、鸭肉、鸡蛋)进行四种病原菌的检测。结果显示,在总共315份检测样品中,沙门氏菌检出率为20.9%(66/315)、空肠弯曲杆菌检出率为7%(13/185)、单核细胞增生李斯特菌检出率为3%(7/185),未检出O157:H7(0/185)。
对检出沙门氏菌菌株进行的血清型鉴定发现,动物源性食品最常见的血清型依次为猪霍乱沙门氏菌、德比沙门氏菌、鸡沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌等,而从临床病禽中检出的最常见血清型依次为鸡沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、爪哇那沙门氏菌和纽波特沙门氏菌。
本课题研究结果证明,建立的四重PCR检测方法能快速、高效地检测食源性致病菌,可作为现用国标法的补充。广西南宁市售动物源性食品致病菌以沙门氏菌污染为主,除动物自身患病为主要的污染来源之外,还有其他的途径。