【摘 要】
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目的:通过对痰湿型多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵巢颗粒细胞中胰岛素受体（INSR）基因启动子区甲基化水平、INSR/PI3K/GLUT4信号通路表达水平变化及苍附导痰汤干预的研究,探讨痰湿型PCOS在表观遗传角度可能的发病机制及苍附导痰汤的治疗机制,从理论和分子水平丰富对PCOS疾病的认识。方法:选取66例拟行IVF-ET助孕的痰湿型PCOS患者,随机均分为试验组（苍附导痰汤颗粒）33例,对照组
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目的:通过对痰湿型多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵巢颗粒细胞中胰岛素受体（INSR）基因启动子区甲基化水平、INSR/PI3K/GLUT4信号通路表达水平变化及苍附导痰汤干预的研究,探讨痰湿型PCOS在表观遗传角度可能的发病机制及苍附导痰汤的治疗机制,从理论和分子水平丰富对PCOS疾病的认识。方法:选取66例拟行IVF-ET助孕的痰湿型PCOS患者,随机均分为试验组（苍附导痰汤颗粒）33例,对照组（安慰剂颗粒）33例,另选取因男方因素行IVF-ET助孕的患者33例为空白组（安慰剂颗粒）,试验组和对照组患者均采用达英-35进行预处理,三组患者采用固定拮抗剂方案进行超促排卵。统计比较试验组与对照组患者治疗前后痰湿证候积分、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、体重指数（BMI）的变化情况;比较三组患者促性腺激素（Gn）的用量、Gn天数,扳机日血雌二醇（E2）、促黄体生成素（LH）、孕酮（P）水平,获卵数、受精率、优质胚胎率和累计妊娠率。采用亚硫酸氢盐扩增子测序（BSAS）测定三组患者卵巢颗粒细胞中INSR基因启动子区甲基化水平的变化;实时荧光定量核酸扩增检测系统（q PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）测定INSR/PI3K/GLUT4m RNA和蛋白的含量。结果:1.治疗后试验组中医痰湿证候积分及HOMA-IR评分较治疗前均有显著下降（P＜0.05）,对照组治疗前后中医痰湿证候积分及HOMA-IR评分无显著差异（P＞0.05）,中医痰湿证候积分及HOMA-IR评分治疗前后差值试验组均显著大于对照组（P＜0.05）。2.治疗后试验组BMI显著低于治疗前（P＜0.05）;对照组治疗前后BMI无显著变化（P＞0.05）。3.三组患者Gn天数比较无显著性差异（P＞0.05）;试验组和空白组Gn用量均明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。4.三组患者扳机日E2、LH、P水平无显著性差异（P＞0.05）,但试验组扳机日E2水平较对照组有所升高。5.试验组与对照组获卵数无显著性差异（P＞0.05）,试验组获卵数显著高于空白组（P＜0.05）;试验组优质胚胎率显著高于对照组（P＜0.05）,空白组受精率和优质胚胎率均显著高于对照组（P＜0.05）;三组患者累计妊娠率差异无统计学意义（P＞0.05）,但试验组和空白组累计妊娠率均高于对照组。6.试验组和空白组INSR pair1片段38、47、56、94、143位点平均甲基化水平显著低于对照组（P＜0.05）;试验组47、56、94、143位点平均甲基化水平明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白组38、47、56、94、143位点平均甲基化水平显著低于对照组（P＜0.05）;空白组47、94、143位点平均甲基化水平显著低于试验组（P＜0.05）。7.试验组和空白组颗粒细胞中INSR、PI3K、GLUT4基因m RNA表达均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白组INSR、PI3K m RNA表达显著高于试验组（P＜0.05）;试验组和空白组GLUT4 m RNA表达无显著性差异（P＞0.05）。8.试验组和空白组颗粒细胞INSR、PI3K、GLUT4基因蛋白表达均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白组INSR、GLUT4基因蛋白表达显著高于试验组（P＜0.05）;试验组和空白组PI3K蛋白表达无显著性差异（P＞0.05）。9.三组患者颗粒细胞INSR基因m RNA相对表达量与INSR基因甲基化水平呈负相关,具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.苍附导痰汤在改善痰湿型PCOS患者的临床症状方面有着正向调节作用。2.痰湿型PCOS患者的发病可能与颗粒细胞中INSR基因启动子区甲基化水平升高及INSR/PI3K/GLUT4信号通路表达的下调有关。3.痰湿型PCOS患者卵巢颗粒细胞中INSR/PI3K/GLUT4信号通路表达的下调可能与INSR基因启动子区甲基化水平的升高有关。4.健脾燥湿化痰法可能是通过降低INSR基因启动子区甲基化水平,上调INSR/PI3K/GLUT4通路的m RNA和蛋白的表达来改善痰湿和胰岛素抵抗状态,增加卵泡发育的能量供应,提高卵子质量,获得更好的受精率和优质胚胎率,从而使得妊娠率有所提高。进一步丰富“卵巢藏泄”理论和“健脾燥湿化痰促生殖”的内涵。
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