宫颈癌是威胁女性生命的主要恶性疾病之一,其形成与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染密不可分。HPV致瘤基冈E6和E7的持续高表达是正常宫颈上皮细胞恶性转化和恶性表型维持所必需的。E6和E7的致瘤机制与它们对p53、pRb和p21等肿瘤抑制蛋白表达或活性的抑制有关。因此,E6和E7成为理想的宫颈癌治疗靶点。研究发现,三氧化二砷(As2O3)和去甲二氢愈创木酸(NDGA)对宫颈癌细胞均具有显著的抑制效应,然而潜在的分子机制并不清楚。为此,以HeLa(HPV-18阳性)、SiHa(HPV-16阳性)和C-33A(HPV阴性)等宫颈癌细胞以及其他类型癌细胞和正常细胞为实验对象对此进行了一些初步研究。　　 As2O3处理48h能显著抑制HeLa细胞的生存并呈浓度依赖性,同时HPV-18 E7的转录也受到显著抑制。E6和E7基因的转录主要受基因上游的上游调节区(URR)控制,该区域包含众多顺式作用元件。为了对As2O3在URR上的作用位点进行初步定位,构建了6个含不同长度URR片段的CAT报告质粒。CAT ELISA结果表明As2O3在URR上主要有3个作用区段,As2O3对HPV-18 E6/E7转录的抑制效应可能是这些区段综合效应的结果。同时,也注意到URR的5段在此过程中起着非常重要的作用。然而,目前已知的转录因子结合序列都集中在URR中段和近启动子段,所以有必要对URR的5段上的转录因子结合序列进行进一步的研究。　　 同As2O3一样,脂氧合酶抑制剂NDGA也具有抗病毒、抗肿瘤活性。发现,NDGA处理72h能够显著抑制宫颈癌SiHa细胞等癌细胞的生存,且阻滞SiHa细胞的细胞周期于G1期,上述效应均呈时间和剂量依赖性。然而,NDGA对NIH3T3等正常细胞的生存没有影响,表明NDGA的抑制效应具有肿瘤特异性。P21是重要的细胞周期调节蛋白,也是肿瘤抑制蛋白,常在宫颈癌中表达缺失。P21的转录水平主要与其启动子区域组蛋白的乙酰化水平及p53等转录因子有关。发现,NDGA处理显著提高SiHa细胞内总体和p21基因启动子区域组蛋白H3的乙酰化水平。然而,该效应具有基因选择性,因为NDGA对p27基因没有该效应。SMRT(silencing mediator for retinoid and thyroid hormone receptors)是HDAC3-HDAC4-N-CoR/SMRT复合物中的关键组分之一,SMRT基因的沉默会导致p21表达上调。发现NDGA显著抑制SMRT的转录。NDGA还抑制SiHa细胞中HPV-16 E6的表达,进而导致其靶蛋白p53蛋白水平上调。NDGA对SMRT和p53的效应可能是其促进p21基因启动子区域组蛋白H3乙酰化的原因。据此,认为NDGA通过诱导p21表达抑制SiHa细胞的生存,而p21表达的恢复与NDGA选择性上调p21基因启动子区域组蛋白H3乙酰化以及HPV-16 E6下调引起的p53蛋白水平上调有关。