湿疹为临床常见病,多发病,是由机体内外激发因子引起的一种迟发型变态反应,并伴随激烈瘙痒或皮肤炎症现象。西药多采用激素、抗生素或抗组胺类药物治疗该病,长期使用,毒副作用大,临床使用受限。湿疹方是治疗湿疹的临床验方,由黄连、苦参、牡丹皮及冰片等4味中药组成,具有清热解毒、燥湿止痒、调节机体免疫的功效,该方临床以洗剂外用,疗效确切,但存在药效成分不明确,提取制备方法原始、粗简,缺乏标准,内在质量难以控制,载药量小,作用时间短,生物利用率低等缺点,同时洗剂使用和携带均不方便,影响了其临床推广应用。为了提升该方质量稳定性,增强药效成分的透皮性能,提高疗效及患者的使用依从性,在前期洗剂的研究基础上,本课题对湿症方进行了系统研究,取得了较满意的结果。本文首先通过湿疹方提取、纯化工艺路线的研究,确定了湿疹方的最佳提取纯化工艺路线,优化了处方中各中药的提取、纯化工艺,通过处方前研究掌握了各纯化物的理化性质,综合应用微乳与凝胶制备技术,将湿疹方纯化物药物,制备成了复方湿疹微乳凝胶剂,并对其进行质量评价。全文主要研究内容如下：1湿疹方提取纯化工艺路线的确定针对本制剂制备的需要,分别采用药效学方法,以小鼠接触性湿疹模型中耳肿胀抑制率为评价指标,探讨本品处方中药材分煎、合煎以及不同提取组分物对药效的影响。结果表明,与模型对照组比较,单煎组与合煎组对小鼠接触性湿疹均有明显的抑制作用(P<0.01),且两组之间无明显差别(P>0.05),提示,处方中药材可采用单独提取,所得提取纯化物加入处方量冰片制备成制剂；采用正交试验法,以小鼠接触性湿疹中耳肿胀抑制率为考察指标,考擦本品处方量黄连、苦参、牡丹皮不同提取纯化物与冰片混合后的药效,结果表明,黄连总生物碱纯化物、苦参总生物碱纯化物、丹皮酚、冰片混合物作用最好,初步确定处方各中药提取纯化工艺路线,为湿疹方各中药的提取方法和后续的处方工艺研究奠定了基础。2提取纯化工艺的优化(1)指标成分的含量测定：采用HPLC法分别对黄连总生物碱纯化物指标成分“HLJ”(盐酸小檗碱、巴马汀、黄连碱及表小檗碱总和)、苦参总生物碱纯化物指标成分“K”(苦参碱与氧化苦参碱总和)及丹皮酚进行了含量测定,建立的方法灵敏准确,简单实用,为本课题的研究提供了可靠的检测手段。(2)黄连提取纯化工艺优化：以HLJ的转移率为考察指标,优选黄连提取纯化工艺。采用单因素与正交试验结合法,确定黄连提取工艺为：取黄连药材饮片,加8倍量1.5%(m/m)硫酸溶液回流提取3次,每次40分钟,HLJ提取率高达93%；提取液以酸碱置换及盐析相结合的方法,制得黄连总生物碱纯化物,总碱含量(以HLJ计)大于80%,得率7.70%,方法工艺稳定,可行。(3)苦参提取纯化工艺优化：以K的转移率为考察指标,优选苦参提取纯化工艺。采用单因素试验结合星点设计.效应面法,确定苦参提取工艺为：取苦参药材饮片,加11倍量65%的乙醇提取2次,每次65分钟,K提取率大于90%,总固物得率大于23%；提取液过732型阳离子树脂柱,制得苦参总生物碱纯化物,总碱含量(以K计)大于41%,得率4.67%,方法工艺稳定,可行。(4)牡丹皮提取纯化工艺优化：采用水蒸气蒸馏法,以丹皮酚收率为考察指标,确定丹皮酚制备工艺为：取牡丹皮药材饮片,加8倍量水,浸泡2小时,共水蒸馏,收集药材5倍量馏出液；馏出液冷藏,取沉淀,制得丹皮酚,丹皮酚含量大于96%,得率1.11%,方法工艺稳定,可行。3处方前研究对黄连总生物碱纯化物、苦参总生物碱纯化物、丹皮酚制剂处方设计前的主要理化性质进行了测试。结果表明,HLJ微溶于水,K易溶于水,其油水分配系数均小于1,其中,K的油水分配系数大于HLJ,丹皮酚易溶于有机溶剂,油水分配系数较大；稳定性试验结果表明,黄连总生物碱纯化物、苦参总生物碱纯化物对光、湿、热稳定,丹皮酚易升华挥发；以黄连总生物碱指标成分HLJ以及丹皮酚为考察指标,对湿疹方的体外透皮性能进行了考察,结果表明,黄连总生物碱中HLJ透皮速率为6.36ug.cm-2.h-1,丹皮酚透皮速率为6.83ug.cm-2.h-1,吸收机制均符合为零级过程。以上工作为剂型的选择和制备工艺的确定提供了依据。4复方湿疹微乳凝胶制备工艺研究为提高药物的透皮性能,采用微乳作为药物载体,结合凝胶剂的特点,制备复方湿疹微乳凝胶。在复方湿疹微乳制备研究中,通过单因素及正交试验筛选出微乳的油相、表面活性剂、助表面活性剂、水相分别为：肉豆蔻酸异丙酯(IPM)、Cremephor EL(EL)、丙三醇、去离子水；通过体外透皮试验,以药物透皮性能为考察指标,确定微乳各相的百分含量,筛选出最佳微乳处方为：IPM6.5%,EL-丙三醇(1：1)58.5%,水35%,所制得的复方湿疹微乳药物透皮效果最佳。对空白微乳理化性质进行了考察,结果显示微乳粒径分布范围10-100nm, Zeta电位为负。微乳对提取纯化物具有增溶性,对试验内的药物、温度、pH值均具有较好的稳定性。以复方湿疹微乳凝胶样品的光泽性、粘稠度、均匀度、涂展性、稳定性为考察指标,筛选出凝胶基质为卡波姆940(CP-940),用量为0.5%,结果表明微乳加入凝胶基质CP-940制成微乳凝胶后,体系的电势能提高,稳定性增强。透射电镜观察呈圆球形,粒径在100nm内。验证试验显示,复方湿疹微乳凝胶制备工艺稳定、可行。5复方湿疹微乳凝胶质量评价生物学评价：通过量效关系的考察确定复方湿疹微乳凝胶的载药量为0.9%,其中黄连总生物碱纯化物含量为0.47%,其余各提取纯化物折算为原处方生药比例加入。小鼠实验性湿疹试验中,相同生药载药量的原湿疹方洗剂与复方湿疹微乳凝胶剂比较,后者较前者药效得到显著提高(P<0.01)。安全性考察试验,结果显示复方湿疹微乳凝胶制剂无不良刺激、无过敏性、无急性毒副作用,复方湿疹微乳凝胶药效强、安全性好。理化评价：对复方湿疹微乳凝胶体理化常数进行评价,分别建立了TLC定性鉴别及HPLC定量分析的方法,方法准确、稳定、简便。通过透射电镜观察微乳呈圆球形,粒径小于100nm；体外透皮试验显示,复方湿疹微乳凝胶较原湿疹方洗剂药物的透皮性能显著提升(P<0.01),其中黄连总生物碱指标成分HLJ透皮速率提高了约16倍,丹皮酚透皮速率提高了约10倍；初步稳定性试验显示,复方湿疹微乳凝胶稳定性良好。本文研制的复方湿疹微乳凝胶制剂,较原湿疹方洗剂,药物透皮性能得到显著提升,药效增强,产品药效成分明确,质量均一、稳定、可控,提高了用药的方便性、舒适性、安全性,具有良好的市场应用前景。