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猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种严重危害养猪业的烈性传染病,疫苗接种是预防猪瘟的有效措施。生产猪瘟疫苗的厂家众多,但不同厂家猪瘟疫苗的剂量存在明显差异,这种差异可能会影响临床免疫效果。本研究通过建立一种快速检测猪瘟疫苗剂量的荧光定量PCR方法来检测京津冀地区常用的6个厂家猪瘟疫苗的病毒载量,检测了较高与较低剂量的2个厂家的猪瘟疫苗接种后猪群血清中猪瘟病毒抗体的动态变化,比较分析了2种猪瘟疫苗的临床免疫效果。用RT-PCR方法扩增猪瘟疫苗病毒(HCLV)基因200 bp片段并克隆到T载体,构建含有该200 bp片段的重组质粒,对此重组质粒进行系列稀释后作为SYBR Green I荧光定量PCR模板,来绘制定量检测HCLV的标准曲线。结果显示,在(6.4×10~7~6.4×10~2)copies/μL模板浓度范围内,荧光定量PCR的扩增效率为92.2%,标准曲线的决定系数为0.9997。该方法的精确灵敏度为6.4×10~2 copies/μL,重复性试验的变异系数小于2%,对牛病毒性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测结果均为阴性,表明建立了1种具有良好特异性、敏感性与可重复性的HCLV荧光定量PCR检测方法。用该方法检测了京津冀地区常用的6个厂家猪瘟疫苗中每头份剂量的病毒载量,结果显示不同厂家猪瘟疫苗的HCLV载量存在明显差异。选取较高剂量猪瘟疫苗E和较低剂量猪瘟疫苗A,在一个基础母猪为900头的猪场进行临床免疫试验。将60头断奶空怀母猪随机平均分为2组,1组接种疫苗E(E组),另1组接种疫苗A(A组),6个月后再分别接种1次;当母猪产仔后,所产仔猪在20 d与60 d时分别免疫1次;采集空怀期、妊娠55 d、哺乳14 d的母猪血清和14 d、35 d、56 d的仔猪血清及77 d、98 d、119d、140 d的生长猪血清,用阻断ELISA方法检测猪瘟病毒抗体。结果显示,在空怀母猪阶段两组无差异。在其他试验阶段,E组猪瘟病毒抗体阻断率一直高于A组,各个阶段均达到显著(P<0.05)水平;除35 d与56 d仔猪外,E组猪瘟病毒抗体阻断率变异系数都小于A组;E组猪瘟病毒抗体阳性率都高于A组,其中在35 d仔猪阶段达到显著水平。抗体检测结果显示,E组猪瘟免疫抗体数据优于A组,表明猪瘟疫苗E的临床免疫效果优于疫苗A,提示较高剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果好于较低剂量疫苗。综合分析表明,建立了1种快速检测猪瘟疫苗剂量的荧光定量PCR方法,不同厂家猪瘟疫苗的剂量存在明显差异,较高剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果优于较低剂量疫苗,为剂量存在差异的不同厂家猪瘟疫苗的临床选用提供了实验依据。