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目的 表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)是茶多酚生物活性的主要成分,具有强抗氧化作用。心肺复苏后脑缺血再灌注损伤涉及病理机制复杂,其中包括有活性氧爆发导致的氧化应激损伤以及线粒体能量代谢障碍。有研究报道EGCG可以通过增强抗氧化作用减轻心肌缺血再灌注损伤以及局灶脑缺血再灌注损伤,但目前尚未见有EGCG对心肺复苏后全脑缺血再灌注损伤及对线粒体影响的报道。本研究通过建立大鼠心脏骤停/心肺复苏(Cardia arrest/Cardiopulmonary resuscitation,CA/CPR)后全脑缺血再灌注损伤模型,于大鼠自主循环恢复(Restoration of Spontaneous Circulation,ROSC)1分钟后给予EGCG,观察EGCG对大鼠CA/CPR全脑缺血再灌注24h后脑组织活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量、对细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated rotein kinase,ERK)磷酸化、对脑组织线粒体通透性转换孔(Mitochondrial permeability transition pore,MPTP)以及对三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)含量和ATP合酶表达量的影响,验证EGCG能否通过抗氧化途径来保护大鼠CA/CPR全脑缺血再灌注后脑组织线粒体结构改善线粒体功能,进而达到减轻CPR后全脑缺血再灌注损伤的设想。方法 经食道交流电(12V)刺激诱导Sprague-Dawley(SD)大鼠CA7min,给大鼠行CPR后造成全脑缺血再灌注损伤,行CPR3min内自主循环恢复(restoration of spontaneous circulation,ROSC)SD大鼠随机分成三组:低剂量EGCG组(Low-EGCG组,n=24)、高剂量EGCG组(High-EGCG组,n=24)、生理盐水组(NS组,n=24)。ROSC 1min时按2.4ml/kg的量于静脉分别给予1.25mg/ml EGCG溶液、3.75mg/ml EGCG溶液和0.9%生理盐水注射液。另随机抽取24只SD大鼠作为假手术组(Sham组,n=24),只进行麻醉及动静脉分离插管,未进行电刺激诱导CA/CPR。以上各组SD大鼠ROSC24h随机分成三个亚组,每个亚组8只大鼠,进行下一步指标检测:1、神经功能评分:SD大鼠ROSC24h后进行神经功能评分。2、脑组织ROS水平:在ROSC24h时四组大鼠随机抽取一个亚组,采用二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光探针检测四亚组SD大鼠脑组织ROS(n=8)。3、脑组织p-ERK的表达:在ROSC24h时四组大鼠随机抽取一个亚组,采用蛋白质印记(Western blot)法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达(n=8)。4、脑组织线粒体MPTP、ATP含量和ATP合酶:在ROSC24h时四组大鼠随机抽取一个亚组,采用纯化线粒体膜通道孔MPTP检测试剂盒、ATP含量检测试剂盒和ATP合酶γ亚基(ATP5C1)Elisa检测试剂盒分别检测四组SD大鼠脑组织线粒体荧光密度反映线粒体MPTP开放情况、ATP含量、ATP合酶γ亚基(ATP5C1)表达量。结果1、神经功能评分Low-EGCG组(76.000±1.549)、High-EGCG组(76.667±1.366)较NS组(75.400±1.647)有升高趋势,无统计学差异(Low-EGCG组VS.NS组,P=0.463;High-EGCG组VS.NS组,P=0.130;High-EGCG组VS.Low-EGCG组,P=0.466)。2、脑组织ROS水平ROSC24h后,与Sham组脑皮层ROS水平(494.25±30.867)比较,NS组(842.63±34.904)明显升高(P<0.01);与NS组、Low-EGCG组(753.75±14.28)比较,High-EGCG组(661.00±28.631)脑皮层ROS水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);Low-EGCG组脑皮层ROS水平较NS组明显降低(P<0.01)。3、脑组织p-ERK相对表达水平ROSC24h后,NS组脑组织p-ERK相对表达水平(73.143±4.187%)比Sham组(49.263±4.617%)明显升高(P<0.01);High-EGCG组脑组织p-ERK相对表达水平(55.986±4.611%)较NS组、Low-EGCG组(64.394±3.751%)减少,差异有统计学意义(P<0.01);与NS组比较,Low-EGCG组脑组织p-ERK相对表达水平明显降低(P<0.01)。4、线粒体MPTP、ATP含量和ATP合酶(ATP5C1)表达量(1)线粒体MPTPROSC24h后,NS组脑组织线粒体荧光密度(2683.833±643.027)比Sham组(5165.500±473.676)明显降低(P<0.01);High-EGCG组脑组织线粒体荧光密度(3492.500±761.265)较NS组升高,差异有统计学意义(P=0.029);与NS组比较,Low-EGCG组脑组织线粒体荧光密度(2917.333±448.195)有升高趋势,无统计学差异(P=0.505)。线粒体荧光密度越低反应线粒体MPTP开放程度越大。(2)ATP含量ROSC24h后,与Sham组脑组织ATP含量(4.291±0.727nmol/g)比较,NS组(1.726±0.345nmol/g)明显降低(P<0.01),与NS组、Low-EGCG组(2.335±0.455 nmol/g)比较,High-EGCG组(3.073±0.435 nmol/g)脑组织ATP含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与NS组比较,Low-EGCG组脑组织ATP含量明显升高(P=0.024)。(3)ATP合酶(ATP5C1)表达量ROSC24h后,与Sham组脑组织ATP5C1含量(16.224±2.375pg/mg)比较,NS组(6.873±2.029 pg/mg)明显降低(P<0.01);与NS组、Low-EGCG组(7.528±1.139 pg/mg)比较,High-EGCG组(10.501±2.019 pg/mg)脑组织ATP5C1含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与NS组比较,Low-EGCG组脑组织ATP5C1含量有升高趋势,无统计学差异(P=0.506)。结论 EGCG可以降低心跳骤停/心肺复苏后大鼠脑组织ROS水平和p-ERK表达,减少线粒体MPTP开放,改善复苏后大鼠脑组织线粒体功能,对脑缺血再灌注损伤有保护作用。