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谷氧还蛋白(GRXs)是植物中广泛存在的一类依赖谷胱甘肽的氧化还原酶,在植物生长发育以及抵御逆境的过程中发挥着重要的作用。植物中的GRXs按照活性位点的保守氨基酸分为CPYC型、CGFS型、CC型三类。水稻中CPYC型GRXs的功能很少被研究,而OsGRX20是CPYC型GRXs的一种。本实验室前期利用蛋白质双向电泳技术,鉴定出1个在接种白叶枯病菌后表达量上调的蛋白,即OsGRX20蛋白,构建了OsGRX20基因过表达和干扰载体,并获得转基因株系。本文则进一步研究OsGRX20在抵抗氧化胁迫方面的功能。实验结果如下:(1)用甲基紫精(MV)处理2个水稻品种幼苗根部后,与品种秀水11相比,甬粳50A茎部的受损伤程度较低,同时,相对干重较高。甬粳50A品种中OsGRX20的表达量在MV处理和45℃高温处理后显著高于秀水11,说明该基因与甬粳50A较强的抗氧化性有关;(2)10μM MV处理水稻根部后,OsGRX20基因过表达株系幼苗的相对鲜重和相对叶绿素含量均高于野生型,而干扰株系中结果正好相反。在MV处理24h时,过表达株系中相对O2·-积累量低于野生型,说明OsGRX20可以提高水稻的抗氧化能力;(3)分析水稻叶片抗氧化相关基因的表达量。OsGRX20过表达株系中抗坏血酸过氧化物酶1基因(OsAPX1).超氧化物歧化酶B基因(OsSodB)以及过氧化氢酶C基因(OsCatC)的表达显著上调。说明OsGRX20可以影响OsAPX. OsSodB以及OsCatC的表达,间接调节水稻的抗氧化性。(4)构建OsGRX20和GFP的融合载体,采用农杆菌浸润法,在本氏烟叶片瞬时表达重组蛋白,通过激光共聚焦显微镜观察OsGRX20的亚细胞定位,结果显示OsGRX20分布在烟草细胞的细胞核和细胞质中。