猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus，PRRSV）引起猪的一种高度传染性疾病。其主要症状表现为妊娠母猪的流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍，以及各种年龄猪（特别是仔猪）的呼吸道症状。该病1987年首次在美国发现，随后遍及世界各个养猪国家，它所导致的母猪的繁殖障碍和仔猪的呼吸障碍已经给世界养猪业带来了沉重的打击。　　 猪圆环病毒病（Porcine circovirus，PCV）是由2型圆环病毒引起的一种传染病，与猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、先天性震颤(CTA2)、猪间质性肺炎(IP)、猪皮炎肾炎综合症(PDNS)等有关。近年来呈现多基因型和高感染率等特点，主要侵害5～16周龄的仔猪，引起仔猪渐进性消瘦、呼吸困难、腹泻、贫血、皮肤苍白和全身淋巴结肿大，导致断奶后与生长期的猪生长迟缓及高淘率，给世界养猪业造成的危害日益加重。　　 针对2009年广东省所采集的480份血清进行了PRRSV特异性抗体的检测，结果发现PRRSV的阳性率为58.54％(281/480)。这些检测结果为更好的了解PRRSV在广东省的流行情况奠定了基础。　　 针对PRRSV ORF5基因组设计了1对特异性引物，利用RT-PCR的方法，对在南方部分地区分离的4株PRRSV ORF5基因进行了基因扩增，获得了4株PRRSV ORF5 基因全长603bp的核苷酸序列。利用生物信息学软件对4株PRRSV ORF5基因序列进行了遗传进化分析，结果显示GD1，GD2，GD3，GD4株与美洲型参考株(VR-2332)的核苷酸序列同源性分别为87.1％、87.2％、87.1％和86.9％。利用系统进化树分析表明GD1，GD2，GD3，GD4株均属于美洲型。进一步采用序列分析软件对病毒结构蛋白推导糖基化位点比较，结果表明不同毒株GP5糖基化位点在基序和位置上均有所不同，这可能与毒株的毒力、免疫原性的差异相关。这些为更好地了解南方地区PRRSV的分子流行病学特征和抗原变异规律提供了依据，同时为研制基因工程疫苗奠定了基础。　　 通过设计引物并导入酶切位点，扩增出了PCV2的ORF2片段和PRRSV的ORF5片段，经酶切将这两个外源的基因片段分别插入到经过改造的杆状病毒穿梭载体pFVC，获得了重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5。将PCV2的ORF2片段和PRRSV的ORF5的片段相连，获得了ORF5-ORF2片段，然后将这个片段插入到经过改造的杆状病毒穿梭载体pFVC中，获得了重组质粒pFVC-ORF5-ORF2。经质粒PCR和测序鉴定后，将重组质粒pFVC-ORF2、pFVC-ORF5、pFVC-ORF5-ORF2分别转入带有杆状病毒骨架的DH10BacTME.coli感受态细胞中进行重组。挑取阳性克隆进行PCR鉴定后，提取高质量的重组质粒Bacmid-ORF5、Bacmid-ORF2、Bacmid-ORF5-ORF2，经脂质体介导将重组质粒转染到Sf9细胞，获取重组病毒Bacmid-ORF5、Bacmid-ORF2、Baemid-ORF5-ORF2。经间接免疫荧光检测证实重组病毒在昆虫细胞中可以正确表达。　　 重组杆状病毒rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5-ORF2免疫BALB/c小鼠后，发现能引起抗体水平升高，通过流式细胞术检测小鼠体内的CD3+、CD4+、CD8+细胞数量的变化，发现CD4+细胞能够随着抗体水平的变化而变化。CD3+、CD8+细胞的变化不显著。将重组杆状病毒rBacmid-ORF5、rBacmid-ORF2、rBacmid-ORF5-ORF2免疫28天的仔猪，发现三种重组杆状病毒均能够引起抗体水平的变化，但是并不能引起足够水平的免疫保护作用。