【摘 要】
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随着近些年来人民生活水平提高,在食品安全影响方面越来越重视,国家也出台了一系列的标准来约束和检测食品中存在的隐患。尤其是食品中常见的有害物质真菌毒素,它常见于谷物及谷类食品,豆类、花生、香料、干果及水果和粮食所酿造的酒类中,具有分布广泛、性质稳定、难以检测、危害严重等特点。而迄今为止,检测真菌毒素的主要方法是仪器法,如高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用,以及快速检测技术,如酶联免疫吸附测定法等。上
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随着近些年来人民生活水平提高,在食品安全影响方面越来越重视,国家也出台了一系列的标准来约束和检测食品中存在的隐患。尤其是食品中常见的有害物质真菌毒素,它常见于谷物及谷类食品,豆类、花生、香料、干果及水果和粮食所酿造的酒类中,具有分布广泛、性质稳定、难以检测、危害严重等特点。而迄今为止,检测真菌毒素的主要方法是仪器法,如高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用,以及快速检测技术,如酶联免疫吸附测定法等。上述方法虽然可以准确地检测出真菌毒素的存在,但却需要繁琐的预处理、昂贵的设备和极规范的专业操作流程。鉴于这种情况,设计一种简单、快速、灵敏和经济的方法来进行真菌毒素定量分析已然成为必然。本研究以介孔二氧化硅为载体,罗丹明6G为信号分子,以真菌毒素赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)为目标物,建立了两种新型的荧光传感器,探索了不同粒径与孔径的对检测方法的影响,具体工作内容如下:(一)介孔二氧化硅荧光传感检测OTA研究。通过溶胶-凝胶法,合成小粒径介孔二氧化硅纳米粒子(Mesoporous silica nanoparticles,MSNs)用作载体,通过透射电镜证明,所合成的介孔二氧化硅粒子的粒径在40 nm~60 nm之间,而孔径在7 nm左右。选取通过SELEX技术筛选的赭曲霉毒素A适配体作为识别探针和门控分子。将荧光染料罗丹明6G(Rhodamine 6G,Rh6G)装载到介孔二氧化硅的孔隙中,通过静电自组装,OTA适配体吸附在氨基改性的介孔二氧化硅颗粒表面,包封住孔隙中的荧光染料。当靶标OTA与适配体相结合时,适配体从介孔二氧化硅表面分离,荧光染料分子从孔中释放,通过测量荧光强度确定OTA的量。研究结果表明荧光强度与OTA浓度呈正相关,检测限为5.4 ng m L-1,并可以用作实际样品检测。(二)高容量介孔二氧化硅荧光传感检测OTA研究。介孔二氧化硅作为一种优良的载体,其孔径和粒径的大小具有可调性,介孔二氧化硅的孔径和粒径是门控传感检测的核心影响因素,为进一步提高信号分子载量与门控可靠性,我们合成粒径大小为150nm,孔径为2 nm的介孔二氧化硅,将其装载荧光染料并包覆适配体。通过紫外光谱考察适配体与介孔二氧化硅微球连接成功,并利用圆二色光谱对适配体与毒素接触后的结构变化进行了表征。在适配体包覆住介孔二氧化硅微球后,通过EDS分析图证明包覆是成功的。并且,通过荧光检测建立标曲,最低检测限为0.28 ng m L-1,说明规整而小的孔径更利于适配体进行门控,从而使得空白降低,最终降低检测限。此种新型的基于介孔二氧化硅的荧光传感检测OTA的方法操作简单、灵敏度好、成本低,并对实际样品进行检测。通过两种不同性能介孔二氧化硅的比较,表明小孔径介孔二氧化硅更适合作为门控检测的载体,建立的两种OTA荧光传感检测,都可作为实际样品的OTA快速筛查,同时也为今后真菌毒素的检测提供了一个方向。
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