原发性肝癌指肝细胞或者肝内胆管细胞发生的恶性肿瘤，是世界上流行最广的恶性肿瘤之一。近几十年来，肝癌的临床诊断主要检测甲胎蛋白等血清标志物，但是甲胎蛋白检测肝癌的特异度和灵敏度不够理想，不能满足临床的需要，因此发现新的肝癌相关标志物变得尤为重要。目前对于肝癌相关标志物的研究大部分基于肝癌细胞系或者血液，然而肝癌细胞系是在体外培养，脱离了人体的内环境，其蛋白的改变可能不能很好地反应机体的病理学改变；而且血清中的蛋白组成非常复杂，从肝癌细胞分泌出来的候选生物标志物可能被清除或极大地稀释，使得寻找新的肝癌血清标志物面临挑战。肿瘤组织间质液作为血液循环和癌细胞的传播媒介，应该包含所有的候选血清标志物，比血清有更高的浓度。因此，肿瘤组织间质液是肿瘤标志物发现的理想来源。本研究运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术对肝癌病人手术切除的肝癌及其癌旁组织中组织间质液蛋白质表达谱进行差异分析，筛选出差异表达的蛋白质；继而运用蛋白质组学技术对筛选出的肝癌候选标志物蛋白AAT和PSMA1进行蛋白质表达的验证。第一部分原发性肝癌组织间质液蛋白的双向凝胶电泳及质谱分析目的：应用蛋白质组学技术分析肝癌及癌旁组织间质液差异表达的蛋白质，并筛选出候选生物标志蛋白。方法：收集8例肝癌病人手术切除的肝癌及癌旁组织，并收集其组织间质液。采用双向凝胶电泳及MALDI-TOF–MS技术对组织间质液样本进行分离鉴定，得到蛋白质的肽质量指纹图谱，再查询NCBI的Mascot数据库鉴定蛋白质，结合生物信息学分析筛选出候选生物标志蛋白。结果：在肝癌及癌旁组织间质液中共筛选出32个差异表达的蛋白质，其中18个蛋白在肝癌组织中高表达，14个蛋白在肝癌组织中低表达。其中AAT蛋白在肝癌组织中表达明显升高，PSMA1蛋白在肝癌组织中表达明显降低。结论：对肝癌及癌旁组织间质液蛋白进行检测，成功地鉴定出差异表达蛋白AAT和PSMA1，两者可能是肝癌相关生物标志物。第二部分候选肝癌生物标志蛋白在细胞株和肝癌病人组织中的表达验证目的：对AAT和PSMA1蛋白进行蛋白和基因表达的验证。方法：运用in-cell western和RT-PCR技术检测AAT和PSMA1蛋白在正常肝细胞株HL-7702和肝癌细胞株SMMC-7721、 HCCLM6的细胞内蛋白表达水平及mRNA表达水平；运用免疫组织化学技术检测AAT蛋白在肝癌和癌旁组织中的表达水平。结果：1.In-cell western结果显示，ATT蛋白在HCCLM6细胞株中表达高于HL-7702和SMMC-7721细胞株，差异有统计学意义（P<0.01）,在HL-7702和SMMC-7721细胞株之间表达无统计学差异（P>0.05）。PSMA1蛋白在SMMC-7721和HCCLM6细胞株中表达均低于HL-7702细胞株，在HCCLM6细胞株中表达低于SMMC-7721细胞株，差异有统计学意义（P<0.01）。2.RT-PCR结果显示，AAT基因在SMMC-7721细胞株中表达高于HL-7702细胞株，相对表达量为1.49；在HCCLM6细胞株中表达低于HL-7702细胞株，相对表达量为0.51。PSMA1基因在SMMC-7721、HCCLM6细胞株中表达均低于HL-7702细胞株，相对表达量分别为0.52、0.57。3.免疫组化结果显示，AAT蛋白在肝癌组织中表达高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.01），肝癌组织AAT蛋白表达在不同临床特征差异无统计学意义（P>0.05）。结论：1.AAT蛋白在乙肝病毒感染型肝癌中表达明显高于正常人，可能是乙肝病毒感染型肝癌的一个生物标志物。2.PSMA1蛋白在肝癌病人的表达低于正常人，可以作为肝癌的一个生物标志物。