砷结合肽的生物淘选及其在砷传感中的应用

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噬菌体随机肽库技术(Phage-Displayed Peptide Library)是一种用于淘选功能性多肽的强大工具,淘选到的多肽可以特异性结合某些重金属,并用于它们的传感检测。砷(As)是一种高度有毒的元素,广泛存在于人类生存环境之中,过度摄入或者长期接触都会严重威胁人类的健康。所以,建立痕量砷检测方法对环境及人类健康具有重大意义。本课题将噬菌体随机七肽库与负载不同金属离子的γ-Fe203-IDA亲和树脂柱进行联用,通过多轮负筛选和正筛选,去除对其他金属离子(Zn、Cd、Fe、Cu)有结合作用的噬菌体,进而筛选并富集到对As(ⅢI)具有较高亲和性的噬菌体。从亲砷噬菌体集合中随机挑取一定数量的噬菌体单克隆,通过DNA测序技术共得到5种As(Ⅲ)结合肽。随后,再将这五种As(Ⅲ)结合肽经过酶联免疫分析,从中选出一种对As(Ⅲ)具有高亲和力和选择性的多肽序列(TQSYKHG)。利用金纳米粒子比色方法,将该亲和性多肽作为目标识别元素,以未经修饰的金纳米粒子作为传感探针,从而建立了一种简单、快速,选择性地检测As(Ⅲ)的新方法。As(Ⅲ)结合肽(TQSYKHGC)可促进金纳米粒子的团聚,而As(Ⅲ)又可通过优先与八肽结合而阻止金纳米粒子的团聚,从而使体系外观呈现裸眼即可观察到的颜色变化,即由金纳米粒子原先的酒红色向蓝紫色发生不同程度的变化。通过体系颜色变化以及UV-Vis即可实现对As(Ⅲ)的检测。该方法具有较好的选择性及较快的响应速度,其检出限为0.0540μmol L-1,线性范围为 0.195-0.600 μmolL-1,精密度为:0.5%。
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