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重金属离子对植物的生长发育的毒害作用非常明显,会改变植物的细胞结构、细胞形态、抑制植物生长、甚至导致死亡。印度芥菜对Cd、Zn等多种重金属有富集或忍耐能力,是作为植物修复技术的一种模式植物。印度芥菜可通过对重金属的螯合、区域化等多种方式解除重金属的毒性,或缓解重金属的毒害。BjCRP1基因是本实验室从CdCl2胁迫印度芥菜中克隆的核糖体相关膜蛋白RAMP4家族基因。本实验利用Genome Walking技术获得了BjCRP1的启动子序列,通过分析启动子的顺式作用元件对BjCRP1的生物学功能进行了预测分析。同时,本研究利用农杆菌侵染法获得了BjCRP1过表达的转基因烟草植株及其T0代种子。通过GUS染色和重金属胁迫处理,对转基因烟草BjCRP1的组织表达部位和对不同重金属胁迫的抗性进行了初步分析。取得的实验研究如下:1.采用染色体步移技术克隆了BjCRP1的启动子。通过生物信息软件分析表明,该启动子全长733bp,含有转录调控的保守元件TATA盒和CAAT盒,此外,还含有多个与重金属响应及抗病、逆境胁迫、激素信号途径、光信号途径、发育有关的顺式作用元件。2.利用农杆菌转染技术,进行了BjCRP1向烟草的转化,获得了T0代转基因烟草植株,通过正常的栽培获得了BjCRP1烟草的T0代种子。3.在正常栽培条件下,与野生型烟草相比(成熟期),BjCRP1烟草株高降低,单叶面积变小,绿色叶片数增多,总绿色叶面积差别不大,总生物量干重显著减少。表明在没有胁迫的条件下,过表达BjCRP1会抑制烟草生物量的累积。4.与野生型对照烟草相比,BjCRP1烟草幼苗对200mg/L ZnCl2、50μmol/LCdCl2、200mmol/L CuSO4`5H2O的耐受性明显增加,表明过表达BjCRP1可显著提高烟草植株对重金属的耐受能力。5.通过GUS染色分析BjCRP1在烟草植株各部位的表达情况,在根部BjCRP1主要位于维管柱部分,在叶部主要位于在叶脉,花中表达的位置有花药、柱头、花丝,靠近底部染色较多,向上变少,花瓣下半部染色较多,向上变少。6.利用农杆菌介导法浸染幼穗,获得了BjCRP1小麦转基因植株。转化效率为41.63%,与PEG法、电激法、离子束介导法、花粉管通道法、基因枪法等方法相比明显增高。