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目的:1.观察细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠外周血单核细胞组织因子(tissue factor,TF)和蛋白酶激活受体(protease activated receptors,PARs)的影响。2.观察血必净注射液对LPS刺激的大鼠外周血单核细胞分泌TF、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α及表达PAR-1、PAR-2的影响。3-观察血必净注射液对脓毒症大鼠外周血单核细胞PAR-1、PAR-2和血浆TF、IL-6、TNF-α的影响。4.观察血必净注射液对脓毒症大鼠凝血功能及血小板(platelet,PLT)的影响。方法:1.分离培养雄性Wistar大鼠外周血单核细胞,用LPS(1μg/ml)刺激,与活化蛋白C(activated protein C,APC)作对比,以终浓度为10mg/ml的血必净注射液干预不同时间(12、24、48及72h)后,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunoadsorbent assay,ELISA)检测细胞上清液TF、IL-6、TNF-α的含量,用流式细胞仪(flow cyometry,FCM)检测细胞表面PAR-1、PAR-2的表达。2.将LPS(1μg/ml)刺激的大鼠外周血单核细胞以1、10及100mg/ml不同终浓度的血必净注射液干预,培养24h后用ELISA检测细胞上清液TF、IL-6、TNF-α的含量,用FCM检测细胞表面PAR-1、PAR-2的表达。3.将104只大鼠按随机数字表分为4组:对照组、假手术组、CLP组和血必净治疗组,分别于手术后12、24、48及72h经腹主动脉取血,分离单核细胞,用FCM检测细胞表面PAR-1、PAR-2的表达,提取血浆,用ELISA检测TF、IL-6、TNF-α的含量,用实时荧光定量聚合酶链反应(real time-polymerase chain reaction,RTPCR)检测外周血单个核细胞TF、IL-6mRNA的表达,并检测凝血酶原时间(prothrombm time,PT)、活化的部分凝血活酶时间(activated partialthromboplastin time,APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)及PLT的变化。结果:1.体外实验中,LPS刺激的大鼠外周血单核细胞在刺激后24、48及72hPAR-1上调(P＜0.01),在刺激后各时间点PAR-2也上调(P＜0.05或P＜0.01),细胞上清中TF、IL-6、TNF-α的含量在刺激后各时间点均增加(P＜0.01)。LPS+APC组较LPS组在干预后24、48及72h PAR-1下调(P＜0.01),在干预后24及48h PAR-2上调(P＜0.01),在干预后各时间点TF、IL-6、TNF-α含量均减少(P＜0.05或P＜0.01)。LPS+血必净组较LPS组在干预后24、48及72h PAR-1下调(P＜0.01),在干预后各时间点PAR-2上调(P＜0.01),在干预后各时间点TF、IL-6、TNF-α含量均减少(P＜0.05或P＜0.01)。2.体外实验中,1、10及100mg/ml不同终浓度的血必净注射液干预组较LPS组PAR-1下调(P＜0.01),细胞上清液TF、IL-6、TNF-α下降(P＜0.05或P＜0.01),以10mg/ml干预组最明显,仅10mg/ml干预组较LPS组PAR-2上调(P＜0.01)。3.与对照组、假手术组相比CLP组大鼠外周血单核细胞PAR-1在手术后48及72h上调(P＜0.05或P＜0.01),PAR-2在手术后各时间点均上调(P＜0.05或P＜0.01);TF在手术后24、48及72h增加(P＜0.05或P＜0.01),IL-6及TNF-α在手术后各时间点均增加(P＜0.05或P＜0.01),外周血单个核细胞TF、IL-6 mRNA的表达在手术后12、24及48h增加(P＜0.05或P＜0.01);PT在手术后24、48及72h缩短(P＜0.05或P＜0.01),APTT在手术后12及48h延长(P＜0.01),FIB在手术后12、24及48h降低(P＜0.05或P＜0.01),PLT在手术后12及24h降低(P＜0.05或P＜0.01)。与CLP组相比,血必净组PAR-1在手术后12及24h下调(P＜0.05或P＜0.01),PAR-2在手术后各时间点均上调(P＜0.05或P＜0.01);TF在手术后24、48及72h下降(P＜0.05或P＜0.01),IL-6在手术后24及48h下降(P＜0.01),TNF-α在手术后各时间点也下降(P＜0.05或P＜0.01),外周血单个核细胞TF mRNA在手术后12、24及48h下降(P＜0.05或P＜0.01),IL-6 mRNA在手术后各时间点也下降(P＜0.05或P＜0.01);PT在手术后24及48h延长(P＜0.05或P＜0.01),APTT在手术后48h缩短(P＜0.05),FIB在手术后12、24及48h增加(P＜0.01),PLT在手术后24及48h增加(P＜0.05或P＜0.01)。结论:1.血必净注射液可减少LPS刺激的大鼠单核细胞PAR-1、TF的表达,抑制IL-6、TNF-α的分泌,以10mg/ml的中等浓度在干预24及48h后最明显,并且此作用优于APC。2.血必净注射液可通过减少脓毒症大鼠单核细胞TF的分泌及下调其表面PAR-1而显著降低血浆IL-6、TNF-α水平,减轻炎症反应,改善凝血功能,验证了体外实验的结果。