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目的:通过对比不同子宫腺肌病建模方法的成模效果,优选子宫腺肌病动物模型,探究桂楼组方通过宫腔缓释给药调控Rho/ROCK通路治疗子宫腺肌病的疗效研究。
方法:选择新生ICR小鼠滴喂他莫西芬药物造模法、ICR小鼠行同种异体垂体移植手术造模法、Wistar大鼠行同种异体垂体移植手术造模法以及本研究创新提出的Wistar大鼠行无创垂体移植造模法四种造模方式,从造模成功率、病理组织学观察、操作难度等方面进行成模评价,优选出子宫腺肌病动物模型。以造模成功后的子宫腺肌病动物模型为受试对象,明确“通脉消癥,化瘀止血”为治疗大法,选取桂枝、重楼、三七提取中药有效组分制成桂楼组方宫腔缓释系统,分为桂楼组方缓释棒组、空白缓释棒组、中药灌胃组干预1月后,采用病理组织学观察、ELISA血清检测VEGF、E2和NF-KB表达、免疫组化检测RhoA、ROCKⅠ、Bcl-2、Bax、TGF-β1蛋白对治疗效果进行统计分析。
结果:1.四种造模组在常规饲养3个月后,子宫组织肉眼均可见不同程度的充血、增粗、结节等情况,空白对照组子宫表面呈现光滑、粗细均匀,未见明显结节;HE切片病理观察证实ICR小鼠药物造模组发病率为95%,ICR小鼠手术造模组发病率为88.9%,Wistar大鼠手术造模组发病率为88.2%,Wistar大鼠无创造模组发病率为89.5%。各模型组与空白对照组相比,HE染色评分皆有统计学意义(P<0.01),各模型组之间差异无显著性(P>0.05),说明本研究中的四种造模方法皆可使子宫内膜及腺体不同程度侵入子宫肌层,诱发子宫腺肌病,且成模效果相似,差异小。同时也证实本研究创新提出的大鼠无创垂体移植术行之有效,可避免其他三种造模方法在实验过程中出现的术后感染、操作难度大、取材量小造成的资源浪费等情况,提高模型利用率,可作为理想子宫腺肌病造模方法。2.桂楼组方缓释棒组和中药灌胃组的HE染色评分皆低于模型组(P<0.01),且桂楼组方缓释棒组HE染色评分低于中药灌胃组,代表以桂楼组方缓释系统局部干预病灶的效果优于口服中药治疗效果;空白缓释棒组与模型组差异无统计学意义(P>0.05),可排除缓释材料对病灶的影响。干预组的VEGF、E2和NF-KB表达呈现明显下降趋势,尤其桂楼组方缓释棒组在下调VEGF表达因子上比中药灌胃组更有治疗优势。与模型组相比,干预后的RhoA、ROCKⅠ、Bcl-2、TGF-β1蛋白表达量下降,Bax蛋白表达量上升。提示桂楼组方缓释系统可通过调节Rho/Rock通路抑制子宫内膜细胞的侵袭,促进细胞凋亡,调节激素水平,控制炎症反应,缓解子宫异位内膜上皮间质转化,从而发挥疗效。
结论:通过对不同子宫腺肌病动物模型建模方式的对比,确定以本研究创新使用无创法行垂体移植术建立的Wistar大鼠子宫腺肌病模型更具有操作简单、成模率高、取材量大、可行性强等明显优势。具有“通脉消癥、化瘀止血”功效的桂楼组方可通过局部干预调控Rho/ROCK通路降低异位内膜细胞侵袭力,促进细胞凋亡,控制炎症、调节激素水平,抑制子宫异位内膜上皮间质转化,对子宫腺肌病起到一定治疗作用。
方法:选择新生ICR小鼠滴喂他莫西芬药物造模法、ICR小鼠行同种异体垂体移植手术造模法、Wistar大鼠行同种异体垂体移植手术造模法以及本研究创新提出的Wistar大鼠行无创垂体移植造模法四种造模方式,从造模成功率、病理组织学观察、操作难度等方面进行成模评价,优选出子宫腺肌病动物模型。以造模成功后的子宫腺肌病动物模型为受试对象,明确“通脉消癥,化瘀止血”为治疗大法,选取桂枝、重楼、三七提取中药有效组分制成桂楼组方宫腔缓释系统,分为桂楼组方缓释棒组、空白缓释棒组、中药灌胃组干预1月后,采用病理组织学观察、ELISA血清检测VEGF、E2和NF-KB表达、免疫组化检测RhoA、ROCKⅠ、Bcl-2、Bax、TGF-β1蛋白对治疗效果进行统计分析。
结果:1.四种造模组在常规饲养3个月后,子宫组织肉眼均可见不同程度的充血、增粗、结节等情况,空白对照组子宫表面呈现光滑、粗细均匀,未见明显结节;HE切片病理观察证实ICR小鼠药物造模组发病率为95%,ICR小鼠手术造模组发病率为88.9%,Wistar大鼠手术造模组发病率为88.2%,Wistar大鼠无创造模组发病率为89.5%。各模型组与空白对照组相比,HE染色评分皆有统计学意义(P<0.01),各模型组之间差异无显著性(P>0.05),说明本研究中的四种造模方法皆可使子宫内膜及腺体不同程度侵入子宫肌层,诱发子宫腺肌病,且成模效果相似,差异小。同时也证实本研究创新提出的大鼠无创垂体移植术行之有效,可避免其他三种造模方法在实验过程中出现的术后感染、操作难度大、取材量小造成的资源浪费等情况,提高模型利用率,可作为理想子宫腺肌病造模方法。2.桂楼组方缓释棒组和中药灌胃组的HE染色评分皆低于模型组(P<0.01),且桂楼组方缓释棒组HE染色评分低于中药灌胃组,代表以桂楼组方缓释系统局部干预病灶的效果优于口服中药治疗效果;空白缓释棒组与模型组差异无统计学意义(P>0.05),可排除缓释材料对病灶的影响。干预组的VEGF、E2和NF-KB表达呈现明显下降趋势,尤其桂楼组方缓释棒组在下调VEGF表达因子上比中药灌胃组更有治疗优势。与模型组相比,干预后的RhoA、ROCKⅠ、Bcl-2、TGF-β1蛋白表达量下降,Bax蛋白表达量上升。提示桂楼组方缓释系统可通过调节Rho/Rock通路抑制子宫内膜细胞的侵袭,促进细胞凋亡,调节激素水平,控制炎症反应,缓解子宫异位内膜上皮间质转化,从而发挥疗效。
结论:通过对不同子宫腺肌病动物模型建模方式的对比,确定以本研究创新使用无创法行垂体移植术建立的Wistar大鼠子宫腺肌病模型更具有操作简单、成模率高、取材量大、可行性强等明显优势。具有“通脉消癥、化瘀止血”功效的桂楼组方可通过局部干预调控Rho/ROCK通路降低异位内膜细胞侵袭力,促进细胞凋亡,控制炎症、调节激素水平,抑制子宫异位内膜上皮间质转化,对子宫腺肌病起到一定治疗作用。